實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞；ARPE-19
形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：該細(xì)胞系源自于一名19歲車禍罹難的健康男性的視網(wǎng)膜組織，由AmyAotaki-Keen建系于1986年。該細(xì)胞系表達(dá)視網(wǎng)膜色素細(xì)胞特有的分子標(biāo)記如胞內(nèi)視黃醛結(jié)合蛋白和PRE-65。

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
(S)-(+)-2-哌 99％Anti-P-cadherin/FITC  熒光素標(biāo)記P-鈣粘附分子抗體IgG綿羊白介素35(IL-35)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(2-) 97%Anti-R-cadherin /FITC  熒光素標(biāo)記R-鈣粘附分子抗體IgG綿羊泛素結(jié)合酶E2C(UBE2C)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

N-芐甘氨乙酯 97%Anti-PCNA/FITC  熒光素標(biāo)記兔抗增值核抗原抗體IgG綿羊胰高血糖素(GC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

吡啶-N-氧化物 95%Anti-PCNA/FITC  熒光素標(biāo)記增殖核抗原抗體IgG綿羊α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鹽喹那普利 98%Anti-PCNA/FITC  熒光素標(biāo)記增殖核抗原抗體IgG綿羊葡萄糖激酶(GCK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

(R)-(-)-3- 氨吡咯烷 98%Anti-PCNA/FITC  熒光素標(biāo)記增殖核抗原抗體IgG綿羊XV 型膠原(COL15)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氮化鉭  5 μm,99.5% metals basisAnti-PCX/FITC  熒光素標(biāo)記足特異蛋白抗體綿羊前列腺素內(nèi)過氧化物合酶2(PTGS2/COX-2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4'-叔丁-4-丁酰 98%Anti-PD-1/FITC  熒光素標(biāo)記程序性死亡1抗體IgG綿羊球蛋白E Fc段受體I(FcεR I)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

化鋇，二水 99.99% metals basisANti-PDCD4/FITC  熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白4抗體IgG綿羊原鈣黏素β16(PCDHβ16)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳鋇 99.95% metals basisAnti-TFAR19/PDCD5 /FITC  熒光素標(biāo)記凋亡相關(guān)蛋白TFAR19抗體IgG綿羊滑行蛋白β(TXLNb)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

氫氧化鋇，八水 AR，98%Anti-PDE4D/FITC  熒光素標(biāo)記二酯酶4D抗體IgG綿羊β素(bTC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

碳鍶 99.95% metals basisAnti-PDEF/FITC  熒光素標(biāo)記上皮特異性ETs轉(zhuǎn)錄因子抗體IgG綿羊線粒體超氧化物歧化酶2(SOD2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

6-溴-2-四氫萘酮 97%Anti-PDGF-A/FITC  熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子-A抗體IgG綿羊胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

間酚 INDAnti-PDGF-B/FITC  熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子-B抗體IgG綿羊胎盤堿性酶(PLAP/ALPP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

化氫-乙溶液 化氫含量: 30-40%Anti-PDGF-BB/FITC  熒光素標(biāo)記血小板源性生長(zhǎng)因子-BB抗體IgG綿羊干擾素誘導(dǎo)Tα亞族趨化因子 (I-TAC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
ARPE-19細(xì)胞25羥維生素D3Elisa試劑盒金標(biāo)記蛋白A(10nm/15nm)GM1(GS)  神經(jīng)節(jié)苷酯抗體

3,4二羥Elisa試劑盒羊抗人球蛋白AGlyR alpha 1/2/3  甘氨受體alpha 1/2/3型抗體

4-羥壬烯Elisa試劑盒兔抗人k-鏈Glypican 6  脂酰蛋白聚糖-6抗體

5羥吲哚乙Elisa試劑盒Glypican 5  脂酰蛋白聚糖-5抗體

5羥色Elisa試劑盒Glypican 4  脂酰蛋白聚糖-4抗體

5-羥色受體7Elisa試劑盒g(shù)lypican 3/GPC3  脂酰蛋白聚糖-3抗體

6酮前列腺素F1αElisa試劑盒g(shù)lypican 1  脂酰蛋白聚糖-1抗體

8羥脫氧鳥苷Elisa試劑盒Glycophorin C/CD236  糖蛋白C抗體

8異前列腺素Elisa試劑盒Glycogen synthase 2  葡萄糖合成酶2抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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