實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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HECS-CQ-EB細胞
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T25
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FS-X3498
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形態(tài)特性：上皮樣
生長特性：貼壁生長
特征特性：該細胞是H.Kuramoto1968年分離的HECS-CQ-EA細胞亞株。不同於HECS-A-1的是：該亞株在培養(yǎng)第135天到190天之間表現(xiàn)出穩(wěn)定的生長周期，且重現(xiàn)扁平，與親本???胞系相比更具鋪路石式樣。此外主要染色體組是親本細胞的兩倍。
培養(yǎng)條件：DMEM(高糖）+10%FBS
傳代方法：1:3傳代，2-3天換液一次
公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
Anti-Phospho-PKA C (Thr197)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶C亞性抗體IgG綿羊CCAAT增強子結(jié)合蛋白γ(C/EBPγ)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-phospho-PKC delta (Thr505)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶C亞性D型抗體IgG綿羊二肽肽酶IV (DPP4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-phospho-PKC delta (Tyr52)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶C亞性D型抗體IgG綿羊Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-phospho-PKC delta (Tyr311)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶C亞性D型抗體IgG綿羊狀腺球蛋白(TG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr514)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶C亞型G抗體IgG綿羊Rho GDP解離抑制因子α(ARHGDIα)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-PKC gamma (Thr674) /FITC 熒光素標記化蛋白激酶C亞型G抗體IgG綿羊胃蛋白酶原C(PGC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-PKB/FITC 熒光素標記蛋白激酶B抗體IgG綿羊質(zhì)衍生因子4(SDF-4)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-PKB/AKT-1 /FITC 熒光素標記蛋白激酶B抗體IgG綿羊轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-P-AKT1/PKB1/2/3(pSer473) /FITC 熒光素標記化蛋白激酶B(pSer473)抗體IgG綿羊葡萄糖-6-脫氫酶(G6PD)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-phospho-Akt(Thr450) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠化蛋白激酶B抗體（蘇氨化位點：450）IgG綿羊激肽釋放酶7(KLK7)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-PRAS40/AKT1 substrate 1/FITC 熒光素標記蛋白激酶AKT底物1抗體IgG綿羊凝血酶受體(TR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-PRAS40 (Thr246)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶AKT底物1抗體IgG綿羊Ras-GTP酶激活蛋白1(Ras-GAP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-PKC beta1/2/FITC 熒光素標記蛋白激酶C beta抗體IgG綿羊趨化素樣因子超家族成員7(CKLFSF7)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-PKC alpha/FITC 熒光素標記蛋白激酶C α抗體IgG綿羊B因子(BF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
Anti-Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641)/FITC 熒光素標記化蛋白激酶C α/β2抗體IgG綿羊核糖體蛋白S6激酶β1(RPS6Kβ1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
HECS-CQ-EB細胞E選擇素Elisa試劑盒大鼠絲氨/蘇氨蛋白酶GLB1L3 β半糖苷酶1樣蛋白3抗體
FMS樣酪氨激酶3配體Elisa試劑盒魚促黃體GKRP 葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白抗體
GATA結(jié)合蛋白3Elisa試劑盒小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧末端肽GK5/Glycerokinase 5 甘油激酶5抗體
G蛋白偶聯(lián)受體120Elisa試劑盒人球蛋白A Fc段受體ⅠGJC2/Connexin 47 間隙連接蛋白47抗體
G蛋白偶聯(lián)受體40Elisa試劑盒兔子5羥色GIT1 G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1
IgA-纖維連接蛋白Elisa試劑盒兔子β內(nèi)肽GIRK3/KCNJ9 G蛋白激活內(nèi)向通道3抗體
III型前膠原Elisa試劑盒小鼠神經(jīng)絲蛋白GIRK2/Kir3.2 G蛋白激活內(nèi)流通道蛋白2抗體
IV型膠原酶Elisa試劑盒魚化腺苷活化蛋白激酶GIRK1 G蛋白激活內(nèi)向通道1抗體
I型膠原Elisa試劑盒人球蛋白E Fc段受體ⅡGIPC-2 胞漿區(qū)相關(guān)蛋白GIPC2抗體
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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