冷凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
|
產(chǎn)品名稱
|
ME-180細(xì)胞
|
|
規(guī)格
|
T25
|
|
貨號(hào)
|
FS-X3503
|
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
特征特性：這株細(xì)胞來源于一個(gè)細(xì)胞集落不規(guī)則沒有顯著角質(zhì)化的侵染性鱗狀細(xì)胞癌。單層培養(yǎng)的細(xì)胞間可以觀察到帶狀連接，也注意到有細(xì)胞質(zhì)張力絲。1970年發(fā)現(xiàn)支原體污染并去除。腫瘤壞死因子(TNF)α抑制ME-180的生長(zhǎng)。這株細(xì)胞含有人**瘤病毒(HPV)DNA，與HPV-39的同源性高于HPV-18。
培養(yǎng)條件：McCOY's5A(SIGMA，添加NaHCO32.2g/L)，90%；胎牛血清，10%。氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。
傳代方法：1:2傳代
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
公司優(yōu)勢(shì)：
1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；
2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。
相關(guān)熱銷產(chǎn)品：
Anti-PSD-95/FITC 熒光素標(biāo)記突觸后密度蛋白95抗體IgG綿羊白三烯C4(LTC4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-P-selectin/CD62p /FITC 熒光素標(biāo)記P選擇素抗體IgG綿羊內(nèi)皮糖蛋白(ENG/CD105)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Phospho-PSD95 (Tyr236/Tyr240) /FITC 熒光素標(biāo)記化突觸后密度蛋白95抗體IgG綿羊蛋白激酶C-ζ(PKCζ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PSMD9/Bridge-1 /FITC 熒光素標(biāo)記蛋白酶調(diào)解因子9抗體IgG綿羊尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子(CDX2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PSP/FITC 熒光素標(biāo)記抗PSP抗體IgG綿羊成纖維生長(zhǎng)因子受體2(FGFR2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Patched/PTCH /FITC 熒光素標(biāo)記Hh信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑膜蛋白受體抗體IgG綿羊β-黑色素(βMSH)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PTEN/MMAC1(NT)/FITC 熒光素標(biāo)記一種腫瘤抑制因（N端）IgG綿羊脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2(LCN2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PTEN/MMAC1 /FITC 熒光素標(biāo)記一種腫瘤抑制因抗體（C端）IgG綿羊干因子受體(SCFR/c-Kit)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Phospho-PTEN (Ser380) /FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制因PTEN抗體IgG綿羊血管**素樣蛋白3(ANGPTL3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Phospho-PTEN (Ser380/Thr382/Thr383)/FITC 熒光素標(biāo)記化腫瘤抑制因PTEN抗體IgG綿羊色素b-561(CYB561)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PTGEs/FITC 熒光素標(biāo)記前列腺素E合成酶抗體IgG綿羊肌-3-激酶催化亞β肽(PIK3Cβ)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PTHrP/FITC 熒光素標(biāo)記狀旁腺相關(guān)蛋白抗體IgG綿羊CD3d分子(CD3d)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-Survivin/RBITC 紅色熒光素羅丹明標(biāo)記 Survivin 蛋白抗體(標(biāo)記抗體)綿羊末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9(TCC C5b-9)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PTN/FITC 熒光素標(biāo)記多效生長(zhǎng)因子抗體IgG綿羊XVII型膠原(COL17)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
Anti-PTP-1B/FITC 熒光素標(biāo)記PTP-1B蛋白抗體IgG綿羊泛素連接酶E3A (UBE3A)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
ME-180細(xì)胞USP21Elisa試劑盒癌胚抗原定量 GERP/TRIM8/RNF27 環(huán)指蛋白27抗體
WNT1可誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑蛋白1Elisa試劑盒癌胚抗原定性(一/二步夾心法)Gephyrin 橋尾蛋白抗體
α1性糖蛋白Elisa試劑盒鐵蛋白Gentamicin(3G7) 慶大霉素單克隆抗體
αL艾杜糖苷酶Elisa試劑盒β2-微球蛋白Gentamicin 慶大霉素抗體
αL巖藻糖苷酶Elisa試劑盒前列腺特異性抗原Geminin DNA復(fù)制抑制因子抗體
α-防御素Elisa試劑盒上皮類癌相關(guān)抗原Gelsolin 凝溶膠蛋白抗體
α-酶Elisa試劑盒卵巢癌相關(guān)抗原GDPD5 甘油二酯酶結(jié)構(gòu)域5抗體
α干擾素Elisa試劑盒癌相關(guān)抗原GDPD3 甘油二酯酶結(jié)構(gòu)域3抗體
α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶Elisa試劑盒胰腺癌相關(guān)抗原GDPD2/GDE3 促進(jìn)成骨分化因子抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：
1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞
在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。
3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性
通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。
- 溫馨提示：為規(guī)避購(gòu)買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購(gòu)買前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊(cè)會(huì)員自行發(fā)布，若信息的真實(shí)性、合法性存在爭(zhēng)議，平臺(tái)將會(huì)監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報(bào)