實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：非小細胞肺癌細胞
生長特性：懸浮生長

培養(yǎng)條件：ACL-4medium(serum-free)

ThebasemediumforthisCA-lllineisATCCformulatedDMEM:F12MediumCatalogNo.30-2006.Tomakethecompletegrowthmedium,addthefollowingcomponentstothebasemedium:

0.02mg/mlinsulin

0.01mg/mltransferrin

25nMsodiumselenite(finalconc.)

50nMHydrocortisone(finalconc.)

1ng/mlEpidermalGrowthFactor(donotfilter)

0.01mMethanolamine(finalconc.)

0.01mMphosphorylethanolamine(finalconc.)

100pMtriiodothyronine(finalconc.)

0.5%(w/v)bovineserumalbumin(finalconc.)

0.5mMsodiumpyruvate(finalconc.)

extra2mML-glutamine(forfinalconc.of4.5mM

傳代方法：隨細胞的生長而換液

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凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
白細胞抗原DR(HLA-DR)elisa檢測試劑盒英文名稱：HLA-DR ELISA Kit，英文縮寫：HLA-DR，產(chǎn)品別名：白細胞抗原DR(HLA-DR)ELISA檢測試劑盒，白細胞抗原DR(HLA-DR)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)elisa檢測試劑盒英文名稱：AGPs ELISA Kit，英文縮寫：AGPs，產(chǎn)品別名：阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA檢測試劑盒，阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

白介素21(IL-21)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL-21 ELISA Kit，英文縮寫：IL-21，產(chǎn)品別名：白介素21(IL-21)ELISA檢測試劑盒，白介素21(IL-21)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

β-防御素3(β-BD-3)elisa檢測試劑盒英文名稱：β-BD-3 ELISA Kit，英文縮寫：β-BD-3，產(chǎn)品別名：β-防御素3(β-BD-3)ELISA檢測試劑盒，β-防御素3(β-BD-3)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

α輔肌動蛋白3(ACTN-3)elisa檢測試劑盒英文名稱：ACTN-3 ELISA Kit，英文縮寫：ACTN-3，產(chǎn)品別名：α輔肌動蛋白3(ACTN-3)ELISA檢測試劑盒，α輔肌動蛋白3(ACTN-3)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

toll樣受體2(TLR2)elisa檢測試劑盒英文名稱：TLR2 ELISA Kit，英文縮寫：TLR2，產(chǎn)品別名：toll樣受體2(TLR2)ELISA檢測試劑盒，toll樣受體2(TLR2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)elisa檢測試劑盒英文名稱：P-gp ELISA Kit，英文縮寫：P-gp，產(chǎn)品別名：P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)ELISA檢測試劑盒，P糖蛋白/滲透性糖蛋白(P-gp)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)elisa檢測試劑盒英文名稱：GPR109A ELISA Kit，英文縮寫：GPR109A，產(chǎn)品別名：G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)ELISA檢測試劑盒，G蛋白偶聯(lián)受體109A(GPR109A)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)elisa檢測試劑盒英文名稱：c-myc ELISA Kit，英文縮寫：c-myc，產(chǎn)品別名：c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)ELISA檢測試劑盒，c-myc癌基因產(chǎn)物(c-myc)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

B細胞生長因子(BCGF)elisa檢測試劑盒英文名稱：BCGF ELISA Kit，英文縮寫：BCGF，產(chǎn)品別名：B細胞生長因子(BCGF)ELISA檢測試劑盒，B細胞生長因子(BCGF)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PⅡNP ELISA Kit，英文縮寫：PⅡNP，產(chǎn)品別名：Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)ELISA檢測試劑盒，Ⅱ型前膠原N端前肽(PⅡNP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
NCI-H1770細胞PTPN7/HePTP  非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗體規(guī)格 0.2ml

PTPN6/SHP1  蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體規(guī)格 0.1ml

PTPN4/MEG1  蛋白酪氨酸磷酸酶非受體型4抗體規(guī)格 0.1ml

PTPN11  蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體規(guī)格 0.1ml

PTPIP51/FAM82A2  蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白51抗體規(guī)格 0.2ml

PTPH1/PTPN3  蛋白酪氨酸磷酸酶H1抗體規(guī)格 0.2ml

PTP1B  蛋白酪氨酸磷酸酶-1B規(guī)格 0.1ml
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。