實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：小細(xì)胞肺癌
生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：HITES+5%FBSThebasemediumforthisCA-lllineisATCCS-formulatedDMEM:F12MediumCatalogNo.30-2006.Tomakethecompletegrowthmedium,addthefollowingcomponentstothebasemedium

0.005mg/mlInsulin

0.01mg/mlTransferrin

30nMSodiumselenite(finalconc.)

10nMHydrocortisone(finalconc.)

10nMbeta-estradiol(finalconc.)

extra2mML-glutamine(forfinalconc.of4.5mM)

5%fetalbovineserum(finalconc.)

傳代方法：每周換液2-3次

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：anti-Mi2-Ab ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：anti-Mi2-Ab，產(chǎn)品別名：人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒，人抗Mi2抗體(anti-Mi2-Ab)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H1(ITIH1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：ITIH1 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：ITIH1，產(chǎn)品別名：間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H1(ITIH1)ELISA檢測(cè)試劑盒，間α-胰蛋白酶抑制因子重鏈H1(ITIH1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

金葡腸素(SE)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SE ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：SE，產(chǎn)品別名：金葡腸素(SE)ELISA檢測(cè)試劑盒，金葡腸素(SE)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：SDF-1a/CXCL12 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：SDF-1a/CXCL12，產(chǎn)品別名：基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA檢測(cè)試劑盒，基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

肌強(qiáng)直蛋白蛋白激酶(DMPK)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：DMPK ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：DMPK，產(chǎn)品別名：肌強(qiáng)直蛋白蛋白激酶(DMPK)ELISA檢測(cè)試劑盒，肌強(qiáng)直蛋白蛋白激酶(DMPK)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

黑色素瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：MAGED4/MAGED4B ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：MAGED4/MAGED4B，產(chǎn)品別名：黑色素瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)ELISA檢測(cè)試劑盒，黑色素瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

胱天蛋白酶-5(CASP5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：CASP5 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：CASP5，產(chǎn)品別名：胱天蛋白酶-5(CASP5)ELISA檢測(cè)試劑盒，胱天蛋白酶-5(CASP5)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

谷氨酸脫羧酶(GAD)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：GAD ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：GAD，產(chǎn)品別名：谷氨酸脫羧酶(GAD)ELISA檢測(cè)試劑盒，谷氨酸脫羧酶(GAD)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：L-FABP ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：L-FABP，產(chǎn)品別名：肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)ELISA檢測(cè)試劑盒，肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

富組氨酸糖蛋白(HRG)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：HRG ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：HRG，產(chǎn)品別名：富組氨酸糖蛋白(HRG)ELISA檢測(cè)試劑盒，富組氨酸糖蛋白(HRG)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

泛素蛋白(Ub)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱：Ub ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：Ub，產(chǎn)品別名：泛素蛋白(Ub)ELISA檢測(cè)試劑盒，泛素蛋白(Ub)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。
NCI-H1105細(xì)胞PIM3  絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶PIM3抗體規(guī)格 0.2ml

PIM1  絲氨酸/蘇氨酸激酶蛋白Pim1抗體規(guī)格 0.2ml

PILR beta  細(xì)胞表面受體PILRβ抗體規(guī)格 0.2ml

PILR beta  細(xì)胞表面受體PILRβ抗體規(guī)格 0.2ml

PIK3CA  磷脂酰肌醇激酶催化亞單位A抗體規(guī)格 0.2ml

PIK3C3/PI3 kinase type 3  磷脂酰肌醇激酶3催化亞單位3抗體規(guī)格 0.1ml

PIH1D1/NOP17  核仁同源蛋白17抗體規(guī)格 0.2ml
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。