實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱(chēng)：卵巢癌細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)條件：Ham'sF12+10%FBS

傳代方法：1:2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
真核翻譯起始因子6(EIF6)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：EIF6 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：EIF6，產(chǎn)品別名：真核翻譯起始因子6(EIF6)ELISA檢測(cè)試劑盒，真核翻譯起始因子6(EIF6)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

原鈣黏素β6(PCDHβ6)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：PCDHβ6 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：PCDHβ6，產(chǎn)品別名：原鈣黏素β6(PCDHβ6)ELISA檢測(cè)試劑盒，原鈣黏素β6(PCDHβ6)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：REG3γ ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：REG3γ，產(chǎn)品別名：再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)ELISA檢測(cè)試劑盒，再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

釉原蛋白X-連鎖(AMELX)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：AMELX ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：AMELX，產(chǎn)品別名：釉原蛋白X-連鎖(AMELX)ELISA檢測(cè)試劑盒，釉原蛋白X-連鎖(AMELX)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

乙醇脫氫酶5(ADH5)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ADH5 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：ADH5，產(chǎn)品別名：乙醇脫氫酶5(ADH5)ELISA檢測(cè)試劑盒，乙醇脫氫酶5(ADH5)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

氧橋二十烷受體1(OXER1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：OXER1 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：OXER1，產(chǎn)品別名：氧橋二十烷受體1(OXER1)ELISA檢測(cè)試劑盒，氧橋二十烷受體1(OXER1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MTHFR ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：MTHFR，產(chǎn)品別名：亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)ELISA檢測(cè)試劑盒，亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

血紅素氧合酶2(HO2)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：HO2 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：HO2，產(chǎn)品別名：血紅素氧合酶2(HO2)ELISA檢測(cè)試劑盒，血紅素氧合酶2(HO2)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

血管非炎性蛋白1(VNN1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：VNN1 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：VNN1，產(chǎn)品別名：血管非炎性蛋白1(VNN1)ELISA檢測(cè)試劑盒，血管非炎性蛋白1(VNN1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

信號(hào)素6B(SEMA6B)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：SEMA6B ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：SEMA6B，產(chǎn)品別名：信號(hào)素6B(SEMA6B)ELISA檢測(cè)試劑盒，信號(hào)素6B(SEMA6B)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

小腦肽3(CBLN3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CBLN3 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：CBLN3，產(chǎn)品別名：小腦肽3(CBLN3)ELISA檢測(cè)試劑盒，小腦肽3(CBLN3)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。
RMG-I細(xì)胞Phospho-NFKB p65(Ser276)  磷酸化細(xì)胞核因子NF-κB p65抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-NFATc2(Ser330)  磷酸化核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-NFATc2(Ser326)  磷酸化核因子活化T細(xì)胞胞漿蛋白2抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-NFAT5 (Ser1197)  磷酸化活化T細(xì)胞核因子5蛋白抗體規(guī)格 0.1ml

Phospho-NF2(Ser518)  磷酸化2型神經(jīng)纖維瘤抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-NF1(Ser2817)  磷酸化1型神經(jīng)纖維瘤抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-NF1(Ser2515)  磷酸化1型神經(jīng)纖維瘤抗體規(guī)格 0.1ml
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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