實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：惡性黑色素瘤細胞
形態(tài)特性：上皮細胞

生長特性：貼壁生長

EMEM+10%FBS

1:2-1:4傳代，2天換液1次。

公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
多藥耐藥關(guān)聯(lián)蛋白1(MRP1)elisa檢測試劑盒英文名稱：MRP1 ELISA Kit，英文縮寫：MRP1，產(chǎn)品別名：多藥耐藥關(guān)聯(lián)蛋白1(MRP1)ELISA檢測試劑盒，多藥耐藥關(guān)聯(lián)蛋白1(MRP1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

低分子量激肽原(LMWK)elisa檢測試劑盒英文名稱：LMWK ELISA Kit，英文縮寫：LMWK，產(chǎn)品別名：低分子量激肽原(LMWK)ELISA檢測試劑盒，低分子量激肽原(LMWK)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

端錨聚合酶1(TNKS1)elisa檢測試劑盒英文名稱：TNKS1 ELISA Kit，英文縮寫：TNKS1，產(chǎn)品別名：端錨聚合酶1(TNKS1)ELISA檢測試劑盒，端錨聚合酶1(TNKS1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

蛋白Z依賴性蛋白酶抑制因子(ZPI)elisa檢測試劑盒英文名稱：ZPI ELISA Kit，英文縮寫：ZPI，產(chǎn)品別名：蛋白Z依賴性蛋白酶抑制因子(ZPI)ELISA檢測試劑盒，蛋白Z依賴性蛋白酶抑制因子(ZPI)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

素受體1(CNR1)elisa檢測試劑盒英文名稱：CNR1 ELISA Kit，英文縮寫：CNR1，產(chǎn)品別名：素受體1(CNR1)ELISA檢測試劑盒受體1(CNR1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

成纖維細胞生長因子17(FGF17)elisa檢測試劑盒英文名稱：FGF17 ELISA Kit，英文縮寫：FGF17，產(chǎn)品別名：成纖維細胞生長因子17(FGF17)ELISA檢測試劑盒，成纖維細胞生長因子17(FGF17)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRPA2B1)elisa檢測試劑盒英文名稱：HNRPA2B1 ELISA Kit，英文縮寫：HNRPA2B1，產(chǎn)品別名：不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRPA2B1)ELISA檢測試劑盒，不均一核糖核蛋白A2/B1(HNRPA2B1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

表皮生長因子途徑底物蛋白2(EPN2)elisa檢測試劑盒英文名稱：EPN2 ELISA Kit，英文縮寫：EPN2，產(chǎn)品別名：表皮生長因子途徑底物蛋白2(EPN2)ELISA檢測試劑盒，表皮生長因子途徑底物蛋白2(EPN2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

胞苷脫氨酶(CDA)elisa檢測試劑盒英文名稱：CDA ELISA Kit，英文縮寫：CDA，產(chǎn)品別名：胞苷脫氨酶(CDA)ELISA檢測試劑盒，胞苷脫氨酶(CDA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

斑聯(lián)蛋白(ZYX)elisa檢測試劑盒英文名稱：ZYX ELISA Kit，英文縮寫：ZYX，產(chǎn)品別名：斑聯(lián)蛋白(ZYX)ELISA檢測試劑盒，斑聯(lián)蛋白(ZYX)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

白介素22受體(IL2R)elisa檢測試劑盒英文名稱：IL2R ELISA Kit，英文縮寫：IL2R，產(chǎn)品別名：白介素22受體(IL2R)ELISA檢測試劑盒，白介素22受體(IL2R)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
RPMI-7951細胞phospho-GluR1(Ser849)  磷酸化谷氨酸受體1抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-GluR1(Ser836)  磷酸化谷氨酸受體1抗體規(guī)格 0.1ml

Phospho-Glucocorticoid Receptor (Ser211)  磷酸化糖皮質(zhì)受體抗體規(guī)格 0.1ml

phospho-GIT1(Tyr554)   磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1規(guī)格 0.1ml

phospho-GIT1(Tyr510)   磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1規(guī)格 0.1ml

phospho-GIT1(Ser375)  磷酸化G蛋白偶聯(lián)受體激酶相互作用蛋白1規(guī)格 0.1ml

phospho-GFAP (Ser8)  磷酸化膠質(zhì)纖維酸性蛋白抗體規(guī)格 0.1ml
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。