實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱(chēng)：膀胱癌細(xì)胞
培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

1:2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
補(bǔ)體蛋白4(C4)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：C4 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：C4，產(chǎn)品別名：補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA檢測(cè)試劑盒，補(bǔ)體蛋白4(C4)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

白介素35(IL-35)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：IL-35 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：IL-35，產(chǎn)品別名：白介素35(IL-35)ELISA檢測(cè)試劑盒，白介素35(IL-35)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

苯丙酸諾龍/苯丙酸去甲睪酮(NP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：NP ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：NP，產(chǎn)品別名：苯丙酸諾龍/苯丙酸去甲睪酮(NP)ELISA檢測(cè)試劑盒，苯丙酸諾龍/苯丙酸去甲睪酮(NP)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

白介素12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：IL12RB1/IL12R/IL12RB ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：IL12RB1/IL12R/IL12RB，產(chǎn)品別名：白介素12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)ELISA檢測(cè)試劑盒，白介素12受體亞基β-1(IL12RB1/IL12R/IL12RB)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：MSMB/PRSP ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：MSMB/PRSP，產(chǎn)品別名：β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)ELISA檢測(cè)試劑盒，β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：β2-GP1 Ab IgG ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：β2-GP1 Ab IgG，產(chǎn)品別名：β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)ELISA檢測(cè)試劑盒，β2糖蛋白1抗體IgG(β2-GP1 Ab IgG)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

XC趨化因子受體1(XCR1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：XCR1 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：XCR1，產(chǎn)品別名：XC趨化因子受體1(XCR1)ELISA檢測(cè)試劑盒，XC趨化因子受體1(XCR1)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：S100A8 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：S100A8，產(chǎn)品別名：S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)ELISA檢測(cè)試劑盒，S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

Na+/H+交換體3(NHE3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：NHE3 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：NHE3，產(chǎn)品別名：Na+/H+交換體3(NHE3)ELISA檢測(cè)試劑盒，Na+/H+交換體3(NHE3)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

D二聚體(D2D)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：D2D ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：D2D，產(chǎn)品別名：D二聚體(D2D)ELISA檢測(cè)試劑盒，D二聚體(D2D)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。

CD147分子(CD147)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CD147 ELISA Kit，英文縮寫(xiě)：CD147，產(chǎn)品別名：CD147分子(CD147)ELISA檢測(cè)試劑盒，CD147分子(CD147)檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個(gè)月。
BIU-87細(xì)胞Mouse Anti-Goat IgG/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgG/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 2ml

Mouse Anti-Goat IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 0.3ml

Mouse Anti-Goat IgG/Cy7  Cy7標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgG/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgG/Cy5  Cy5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG規(guī)格 0.1ml
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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