實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：膠質(zhì)瘤細(xì)胞
來源：膠質(zhì)瘤；女性

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
糖蛋白130(gp130/CD130)檢測試劑盒英文名稱：gp130/CD130 ELISA Kit蛇巴曲酶抗體包裝5g

瘦素受體(Leptin receptor)檢測試劑盒英文名稱：Leptin receptor ELISA KitBH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白抗體包裝100ml

瘦素受體(LEPR)檢測試劑盒英文名稱：LEPR ELISA KitBax抗體包裝25ml

瘦素(LEP/Leptin)檢測試劑盒英文名稱：LEP/Leptin ELISA KitBcl-2抗體包裝500ml

噬酸性細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)檢測試劑盒英文名稱：Eotaxin ELISA Kit腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體包裝1g

嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(Eotaxin)檢測試劑盒英文名稱：Eotaxin ELISA Kit堿性成纖維生長因子抗體包裝250mg

生長調(diào)節(jié)致癌基因α(GROα/CXCL1/MGSA)檢測試劑盒英文名稱：GROα/CXCL1/MGSA ELISA Kit癌轉(zhuǎn)移抑制基因1抗體包裝100ml

生長分化因子15(GDF-15)檢測試劑盒英文名稱：GDF-15 ELISA Kit牛血清白蛋白抗體包裝25ml

神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)檢測試劑盒英文名稱：fractalkine/CX3CL1 ELISA Kitβ-酪蛋白抗體包裝5ml

凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)檢測試劑盒英文名稱：LOX-1 ELISA Kitβ葡聚糖受體抗體包裝100g

苗條素受體(Leptin receptor)檢測試劑盒英文名稱：Leptin receptor ELISA Kit蛇蛋白巴曲酶抗體包裝500g

苗條素(OB)檢測試劑盒英文名稱：OB ELISA Kit非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體包裝25mg

苗條素(LEP)檢測試劑盒英文名稱：LEP ELISA Kit磷酸化非受體性蛋白酪氨酸激酶ETK抗體包裝25g

粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)檢測試劑盒英文名稱：GMCSF/CSF2 ELISA Kit磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體包裝5g

可溶性E選擇素(sE-selectin)檢測試劑盒英文名稱：sE-selectin ELISA KitBarX1蛋白抗體包裝100g
SF-539細(xì)胞焦曲霉Human JUNB ELISA KitAlias: JUNBELISAKitReactivity: Human

粘質(zhì)沙雷氏菌Human ITFG1 ELISA KitAlias: ITFG1ELISAKitReactivity: Human

MethylobacteriumHuman Kallikrein 11 ELISA KitAlias: Kallikrein11ELISAKitReactivity: Human

嘴突凸臍蠕孢Human JAKMIP1 ELISA KitAlias: JAKMIP1ELISAKitReactivity: Human

球毛殼Human IYD ELISA KitAlias: IYDELISAKitReactivity: Human

MarisediminicolaHuman KALRN ELISA KitAlias: KALRNELISAKitReactivity: Human

新月彎孢Human JAKMIP2(Janus kinase and microtubule-interacting protein 2) ELISA KitAlias: CTCLtumorantigenHDCL04|JAKMIP2|JAMIP2|KIAA0555|NECC1ELISAKitReactivity: Human

Pectobacterium carotovorum subsp. carotovorumHuman KANK1 ELISA KitAlias: KANK1ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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