冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：喉鱗癌細胞
來源：喉鱗癌

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：貼壁

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

Bullatine G（標準品）英文名稱： Ammomium ferric citrate肝配蛋白A1受體抗體包裝100g

Cimiracemoside英文名稱： Choline chloride真核翻譯起始因子2C2抗體包裝25g

Clemaphenol A英文名稱： D-Gluconolactone眼睛發(fā)育缺失蛋白EYA2抗體包裝500g

Clematichinenoside C英文名稱： Forchlorfenuron,4-CPPU,CPPU,KT-30EYA4蛋白抗體包裝100g

Clematiunicinoside E英文名稱： Magnesium acetate, tetrahydrate血清反應(yīng)因子輔助蛋白1抗體包裝25g

Clematomandshurica saponin ...英文名稱： Sodium phosphate, monobasic, monohydrate吞噬運動蛋白2抗體包裝5g

Corylifol A(標準品)英文名稱： Calcium gluconate, hydrate紅膜條帶4.1蛋白抗體包裝1g

Crassicauline A（標準品）英文名稱： N-Dodecyl-b-maltoside磷酸化紅**素受體抗體包裝25g

Crovatin英文名稱： Aminourea hydrochloride轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子E2F7抗體包裝5g

Croverin英文名稱： Streptomycin sulfate solution, 30 mg/ml膠質(zhì)谷氨酸運載蛋白4抗體包裝1g

D(十)-無葡萄糖(標準品)英文名稱： AcetamideerbB3結(jié)合蛋白1抗體包裝5g

D-(-)-奎寧酸（標準品）英文名稱： 1-Naphthylacetamide烯酰輔酶A合酶1抗體包裝25g

D-阿拉伯糖(標準品)英文名稱： Iron granules烯酰輔酶A合酶含結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體包裝5g

D-果糖（標準品）英文名稱： Iron(III) citrate腫瘤壞死因子受體超家族成員EDAR抗體包裝1g

D-四氫藥根堿（標準品）英文名稱： DL-Lactic acid自身抗原EDC4抗體包裝5g
TU177細胞枯草芽孢桿菌Human PHB(Prohibitin) ELISA KitAlias: PHB|PHB1|prohibitinELISAKitReactivity: Human

地衣芽胞桿菌Human PIK3Cβ(Phosphoinositide-3-Kinase Catalytic Beta Polypeptide) ELISA KitAlias: PIK3Cβ|PIK3C1|PI3-kinasesubunitbeta|PI3K-beta|PI3Kbeta|PtdIns-3-kinasesubunitp110-beta|p110beta|PtdIns-3-kinasesubunitbeta|Phosphatidylinositol-4|5-bisphosphate3-kinase110kDacatalyticsubunitbetaELISAKitReactivity: Human

三線鐮孢Human PK(Pyruvate Kinase, Liver And RBC) ELISA KitAlias: PK|PKLR(pyruvatekinaseisozymeR|L)|PK1|PKL|RPK|PK1|PKRL|PKR|Pyruvatekinase1|pyruvatekinasetypeL|pyruvatekinase|liverandbloodcell|pyruvatekinase|liverandRBC|Redcell|liverpyruvatekinase|R-type|L-typepyruvatekinaseELISAKitReactivity: Human

爪哇根霉Human PLAA(Phospholipase A2 Activating Protein) ELISA KitAlias: PLAAELISAKitReactivity: Human

巨大芽孢桿菌 AHuman PLB(Phospholipase B) ELISA KitAlias: PLBELISAKitReactivity: Human

香菇Human PK2(Prokineticin 2) ELISA KitAlias: PK2(Prokineticin-2)|PROK2|BV8|ProteinBv8homologELISAKitReactivity: Human

美人魚發(fā)光桿菌美人魚亞種Human PLCγ1(Phospholipase C Gamma 1) ELISA KitAlias: PLCγ1|PLCG1|PLC1|PPLCA||PhospholipaseC-gamma-1(PLC-gamma-1)|PhospholipaseC-II(PLC-II)|PhosphoinositidephospholipaseC-gamma-1|monophosphatidylinositolphosphodiesterase|NCKAP3|1-phosphatidylinositol-4|5-bisphosphatephosphodiesterasegamma-1|phosphatidylinositolphospholipaseC|phosphoinositidaseC|phosphoinositidephospholipaseC|PhosphoinositidephospholipaseC-gamma-1|phospholipaseC|gamma1|phospholipaseC-148|PhospholipaseC-gamma-1|PhospholipaseC-IIELISAKitReactivity: Human

仁果叢梗孢Human PLCγ2(Phospholipase C Gamma 2, Phosphatidylinositol Specific) ELISA KitAlias: PLCγ2|PLCG2|PhosphoinositidephospholipaseC-gamma-2|phospholipaseCgamma2|phospholipaseC|gamma2(phosphatidylinositol-specific)|phospholipaseC|gamma2(phosphatidylyinositol-specific)|PhospholipaseC-gamma-2|1-phosphatidylinositol-4|5-bisphosphatephosphodiesterasegamma-2|PhospholipaseC-IV|PLCG2|PLC-gamma-2|PLC-IVELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標記等各種儀器備。