實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞
來源：肺微血管；內(nèi)皮細(xì)胞；SV40轉(zhuǎn)化

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
滇雞血藤（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Decanedioic acid4號染色體開放閱讀框43抗體包裝5g

滇（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dehydroacetic acid細(xì)絲蛋白3抗體包裝1g

化木蘭花堿英文名稱： Demecolcine細(xì)絲蛋白2抗體包裝25g

靛玉紅(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Deoxynivalenol磷酸化細(xì)絲蛋白2抗體包裝5g

丁公藤（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Devarda's alloy磷酸化FMS樣酪氨酸激酶3抗體包裝100mg

基苯酞（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Diacetyl monoxime肢體畸形相關(guān)蛋白FMN1抗體包裝1g

丁香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Diethyl maleate二單加氧酶3抗體包裝5g

丁香酚（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dihydrocytochalasin B二單加氧酶5抗體包裝1g

丁香樹脂雙葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Diisooctylamine磷酸化脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF1抗體包裝1g

丁香酸（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dimethyl maleate果糖-3激酶抗體包裝5g

丁香葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dimethyl succinate精結(jié)合蛋白3抗體包裝100g

丁東莨菪堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Dimethylglyoxime sodium saltⅢ型纖維連接蛋白域蛋白3A抗體包裝25g

東風(fēng)桔（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Direct blue 71Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白4抗體包裝500g

東莨菪苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Direct red 80卵泡結(jié)合蛋白2抗體包裝1g

東莨菪內(nèi)酯;7-羥基-6-氧基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： DL-alpha-Phenylglycine葉酸鹽多谷氨酸合成酶抗體包裝1g
HULECS-5a細(xì)胞果生鏈核盤菌Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA KitAlias: FDPELISAKitReactivity: Human

抗生鏈霉菌Human POTEG(POTE Ankyrin Domain Family Member G) ELISA KitAlias: ANKRD26-likefamilyCmember2|POTE-14|A26C2|POTE14ELISAKitReactivity: Human

谷氨酸棒桿菌Human POTE-D(POTE-D(POTE Ankyrin Domain Family Member D)) ELISA KitAlias: A26B3|ANKRD21|POTEELISAKitReactivity: Human

節(jié)桿菌屬Human FETUB(Fetuin B) ELISA KitAlias: FETUBELISAKitReactivity: Human

黑根須腹菌Human FG(Fibrinogen) ELISA KitAlias: FGELISAKitReactivity: Human

平菇Human FcγR3B(Fc Fragment of IgG Low Affinity IIIb Receptor) ELISA KitAlias: FcγR3B|CD16b|FCG3|FCGR3B|FcR-10|FCRIIIB|IGFR3|CD16|CD16b|CD16B|CD16bantigen|FcfragmentofIgG|lowaffinityIIIb|receptor(CD16b)|FcfragmentofIgG|lowaffinityIIIb|receptorfor(CD16)|FCG3|Fc-gammareceptorIIIb(CD16)|Fc-gammaRIII|Fc-gammaRIIIb|Fc-gammaRIII-beta|FCGR3|FcR-10|fcR-10|fcRIII|FcRIII|FcRIIIb|fcRIIIb|IGFR3|IgGFcreceptorIII-1|lowaffinityimmunoglobulingammaFcregionreceptorIII-BELISAKitReactivity: Human

螺卷毛殼Human fFDFT1(Farnesyl Diphosphate Farnesyltransferase 1) ELISA KitAlias: fFDFT1ELISAKitReactivity: Human

鮮綠青霉Human FDP(Fibrinogen Degradation Product) ELISA KitAlias: FDPELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。