實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：彌漫大B**瘤細(xì)胞
來源：彌漫大B瘤；男性

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：懸浮

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
紅景天（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： n-Amyl mercaptan巖藻糖變旋酶抗體包裝5g

紅景天苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： AmberliteIR-120X三體綜合征相關(guān)蛋白FUNDC1抗體包裝100g

紅景天素；草質(zhì)素甙；英文名稱： Amyl acetate弗林蛋白酶抗體包裝25g

紅芪（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱：  Acetophenone富含絲氨酸/精氨酸重復(fù)結(jié)構(gòu)蛋白抗體包裝500g

紅曲（特殊發(fā)酵）（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Azobenzene巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶6抗體包裝1g

葒草苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Asbestos acid washed巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶7抗體包裝5g

厚樸(厚樸)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Acenaphthene眼睛和頭發(fā)顏色相關(guān)蛋白FUZ抗體包裝10g

厚樸酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Aluminum solution濾泡型轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1/II型慢性性白血病抗體包裝1g

厚樸總酚(對(duì)照品)英文名稱： Aluminum solution磷酸化堿性成纖維生長因子受體1抗體包裝5g

胡薄荷酮;長葉薄荷酮英文名稱： (±)-Catechin hydrateFAM65B蛋白抗體包裝25g

胡黃連（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Elaidic acid胞外分泌型絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶FAM20C抗體包裝5g

胡黃連苷 II(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Heptadecanoic acid凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體包裝25g

胡黃連苷 III（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Heptadecanoic acid纖維母生長因子受體底物3抗體包裝5g

胡黃連苷IV英文名稱： Leucomalachite Green纖維連接蛋白抗體包裝1g

胡黃連苷I（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Methyl ArachidateFCHO1蛋白抗體包裝25g
HBL-1細(xì)胞貝爾氏菌屬Human CENPA(Centromere Protein A) ELISA KitAlias: CENPAELISAKitReactivity: Human

類黃假單胞菌Human CC16(Clara Cell 16kD protein) ELISA KitAlias: CC16|Blastokinin|CC10|CCPBP|CCSP|Clara|PCB-BP|SCGB1A1|UGB|blastokinin|CC10Urineprotein1|CC16|CCSPCCPBP|Claracellphospholipid-bindingprotein|Claracells10kDasecretoryprotein|Secretoglobinfamily1Amember1|secretoglobin|family1A|member1(uteroglobin)|UGBUP-1|UP1|Urinaryprotein1|uteroglobinELISAKitReactivity: Human

葡萄座腔菌Human CFL2(Cofilin 2, Muscle) ELISA KitAlias: CFL2|Cofilin-2|Cofilin|muscleisoformELISAKitReactivity: Human

粗糙脈孢菌Human CENPF(Centromere Protein F) ELISA KitAlias: CENPFELISAKitReactivity: Human

喜堿運(yùn)動(dòng)節(jié)桿菌Human CCK-8(Cholecystokinin 8) ELISA KitAlias: CCK-8ELISAKitReactivity: Human

蠟樣狀芽孢桿菌Human CCKAR(Cholecystokinin A Receptor) ELISA KitAlias: CCKAR|CCK1R|CCK1-R|CCK-A|CCK-Areceptor|CCK-AR|CCKRA|cholecystokininAreceptor|cholecystokininreceptortypeA|cholecystokinintype-Areceptor|Cholecystokinin-1receptorELISAKitReactivity: Human

豬放線桿菌Human CLDN9(Claudin 9) ELISA KitAlias: CLDN9|claudin9|claudin-9ELISAKitReactivity: Human

膜醭畢赤酵母Human CCL3L1(Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1) ELISA KitAlias: CCL3L1|G0S19-2|LD78beta|SCYA3L1|chemokine(C-Cmotif)ligand3-like3|464.2|chemokine(C-Cmotif)ligand3-like|centromeric|G0|G1switchregulatoryprotein19-2|G0S19-2|LD78|LD78BETA|LD78-beta(1-70)|PAT464.2|SCYA3L|SCYA3L1|smallinduciblecytokineA3-like1|Small-induciblecytokineA3-like1|TonsillarlymphocyteLD78betaproteinELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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