實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：小鼠肺成纖維細(xì)胞
來(lái)源：肺；成纖維細(xì)胞；C57

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
人參皂苷F1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： p-Anisaldehyde (contains Acetic Acid, H2SO4) Ethanol Solution間隙連結(jié)蛋白31.9抗體包裝5g

人參皂苷F2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Dimethyl Sulfoxide-d6 99.9atom%D甘油激酶2抗體包裝100g

人參皂苷F3（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Deuterium Oxide 99.8atom%Dβ-半乳糖苷酶1/β-Gal/彈性蛋白受體1抗體包裝25g

人參皂苷F4,人參皂苷Rg4(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Sodium 3-(Trimethylsilyl)-1-propanesulfonate 甘氨酸脫羧酶P蛋白抗體包裝5g

人參皂苷F5(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Dimethylselenide核孔蛋白GLE1抗體包裝1g

人參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tetramethyltin腎小球上皮蛋白1抗體包裝250mg

人參皂苷Rb2（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Zirconocene Dichloride轉(zhuǎn)錄因子Gli4/鋅指蛋白gli4抗體包裝1g

人參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Chirabite-AR麥角蛋白抗體包裝250mg

人參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)praseodymium(III) 膠質(zhì)瘤發(fā)病相關(guān)蛋白1抗體包裝5mg

人參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tris(2,2,6,6-tetramethyl-3,5-heptanedionato)europium(III)糖基轉(zhuǎn)移酶25結(jié)構(gòu)域1/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移酶1抗體包裝1g

人參皂苷Rd2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-octanedionato)praseodymium(III)谷氨酰酰解酶抗體包裝25g

人參皂苷Re(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： (S)-(+)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl Hydrogen Phosphate糖基轉(zhuǎn)移酶25結(jié)構(gòu)域2/前膠原半乳糖基轉(zhuǎn)移酶2抗體包裝5g

人參皂苷Rf(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： (R,R)-(-)-2,3-Butanediol糖基轉(zhuǎn)移酶28家族1抗體包裝100g

人參皂苷Rg1(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： (S,S)-(+)-2,3-Butanediol糖基轉(zhuǎn)移酶6結(jié)構(gòu)1抗體包裝25g

人參皂苷Rg2(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： (-)-Camphanic Acid膠質(zhì)瘤抑癌候選基因2抗體包裝1g
C57/BC-LL細(xì)胞擬熱帶假絲酵母Human WNT2(Protein Wnt-2) ELISA KitAlias: WNT2|NT1L1|IRP|Int-1-likeprotein1|Int-1-relatedprotein|secretedgrowthfactor|Int-1-likeprotein1|Int-1-relatedprotein|IRPproteinWnt-2|wingless-typeMMTVintegRationsitefamilymember2ELISAKitReactivity: Human

馬克斯克魯維酵母Human WWC1(Protein KIBRA) ELISA KitAlias: WWC1|KIAA0869|KIBRA|WWdomain-containingprotein1|HBeAg-bindingprotein3|KidneyandbrainproteinELISAKitReactivity: Human

釀酒酵母Human WIF1(Wnt inhibitory factor 1) ELISA KitAlias: WIF1|WIF-1|WNTinhibitoryfactor1ELISAKitReactivity: Human

卡坦正青霉Human IFIH1(Interferon-induced helicase C domain-containing protein 1) ELISA KitAlias: IFIH1|RNAhelicase-DEADboxprotein116(RLR-2)|Murabutidedown-regulatedprotein|Melanomadifferentiation-associatedprotein5(MDA-5)|Interferon-inducedwithhelicaseCdomainprotein1|RNAhelicase-DEADboxprotein116|Clinicallyamyopathicdermatomyositisautoantigen140kDa(CADM-140autoantigen)|Helicasewith2CARDdomains(Helicard)ELISAKitReactivity: Human

摩洛哥芽孢桿菌Human UACA(Uveal autoantigen with coiled-coil domains and ankyrin repeats) ELISA KitAlias: UACA|KIAA1561ELISAKitReactivity: Human

熱帶假絲酵母Human NUDT1(7,8-dihydro-8-oxoguanine triphosphatase) ELISA KitAlias: NUDT1|MTH1|Nudixmotif1|Nudixmotif1|Nucleosidediphosphate-linkedmoietyXmotif1|3.6.1.56|8-oxo-dGTPase|Nucleosidediphosphate-linkedmoietyXmotif1ELISAKitReactivity: Human

發(fā)狀孢囊游動(dòng)放線菌Human KIRREL(Kin of IRRE-like protein 1) ELISA KitAlias: KIRREL|KIRREL1|NEPH1|kinofIRRElike(Drosophila)|nephrin-likeprotein1ELISAKitReactivity: Human

秦氏蜜環(huán)菌Human LYPD3(Ly6/PLAUR domain-containing protein 3) ELISA KitAlias: LYPD3|MIG-C4|C4.4A2310061G07Rik|GPI-anchoredmetastasis-associatedproteinC4.4Ahomolog|GPI-anchoredmetastasis-associatedproteinhomolog|LY6|PLAURdomaincontaining3|ly6|PLAURdomain-containingprotein3|Matrigel-inducedgeneC4proteinELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，??溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。