實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號
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K1735細胞
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詳見說明書
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FS-X5386
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產(chǎn)品名稱：小鼠黑色素瘤細胞
來源：黑色素瘤；C3H/HeN
培養(yǎng)基：1640
狀態(tài)：貼壁
公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
山姜素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Bathophenanthroline (purified by sublimation)轉(zhuǎn)錄因子Gli3抗體包裝5g
山橿根（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： BathocuproineGLIS2蛋白抗體包裝100g
山臘梅葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Neocuproine Hemihydrate鳥苷酸環(huán)化酶激活蛋白1抗體包裝25g
山蠟梅堿英文名稱： BathophenanthrolineGSK3B相互作用蛋白抗體包裝5g
山綠茶（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 4,7-Dihydroxy-1,10-phenanthroline高爾基體膜相關(guān)蛋白6抗體包裝1g
山麥冬（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 5-Methyl-1,10-phenanthroline Hydrate 高爾基體自身蛋白GM130抗體包裝5g
山麥冬皂苷B英文名稱： 1,10-Phenanthroline-5,6-dione糖代謝相關(guān)蛋白1抗體包裝100mg
山麥冬皂苷B（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： TPP (=Tetraphenylporphyrin) G蛋白偶聯(lián)受體64抗體包裝500mg
山麥冬皂苷J英文名稱： TCPP [=Tetrakis(4-carboxyphenyl)porphyrin] γ氨基丁酸受體相關(guān)蛋白樣1抗體包裝100g
酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Azomethine H 法尼基二磷酸合酶1抗體包裝25g
酚-3-O-β-D-槐糖苷；酚-3-O-槐糖苷英文名稱： N-Methylfurohydroxamic Acid 鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白1抗體包裝1g
酚-4’-O-葡萄糖苷；酚-4’-O-β-D-...英文名稱： 2,2'-Bicinchoninic Acid Dipotassium Salt Hydrate 膠質(zhì)纖維酸性蛋白GFAPδ抗體包裝25g
酚-7-O-葡萄糖苷英文名稱： Chloranilic Acidβ半乳糖苷酶抗體包裝5g
苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Pyrogallol Red巨軸索蛋白GAN抗體包裝25g
素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： ZinconG蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合蛋白O亞基A2抗體包裝5g
K1735細胞*灰葡萄孢Human SMOX(Spermine oxidase) ELISA KitAlias: SMOX(Spermineoxidase)Polyamineoxidase1|PAO-1|PAOh1ELISAKitReactivity: Human
假單胞菌Human AMOT(Angiomotin) ELISA KitAlias: AMOT|KIAA1071ELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human CASP7(Caspase-7) ELISA KitAlias: HumanCASP7(Caspase-7)|ICE-likeapoptoticprotease3(ICE-LAP3)|ApoptoticproteaseMch-3|CMH-1|CASP-7|MCH3|CASP7|Mch3|apoptosis-relatedcysteineprotease|ApoptoticproteaseMch-3|CASP-7|caspase7|apoptosis-relatedcysteinepeptidase|ICE-likeapoptoticprotease3|Lice2alpha|beta|gamma|CASP7|MCH3|ApoptoticproteaseMch-3|CMH-1|ICE-likeapoptoticprotease3|ICE-LAP3ELISAKitReactivity: Human
龜裂鏈霉菌Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) ELISA KitAlias: HumanNEFH|NEFHneurofilament|heavypolypeptide|neurofilament|heavypolypeptid|NFH|200kDaneurofilamentprotein|NeurofilamenttripletHprotein|NF-HELISAKitReactivity: Human
金黃桿菌屬Human HSD11B1(Corticosteroid 11-beta-dehydrogenase isozyme 1) ELISA KitAlias: HSD11B1|11-beta-hydroxysteroiddehydrogenase1|11-DH|11-beta-HSD1|HSD11|11-beta-HSD1|HDL|HSD11B|HSD11L|11-DHELISAKitReactivity: Human
產(chǎn)氨棒桿菌Human SEMA3A(Semaphorin-3A) ELISA KitAlias: SEMA3A|Sema3A|(semaphorin)3A|coll-1|collapsin1|Hsema-I|Hsema-III|semadomain|immunoglobulindomain(Ig)|shortbasicdomain|secreted|SemaIII|SEMA1|SEMAD|SEMAIII|SEMAL|semaphorinD|SemaphorinIII|semaphorinL|semaphorin-3A|SemD|SemaphorinIII(SemaIII)ELISAKitReactivity: Human
堀越氏芽孢桿菌Human HRG(Histidine-rich glycoprotein) ELISA KitAlias: HRG|HPRG|HRGP|THPH11|Histidine-proline-richglycoprotein(HPRG)ELISAKitReactivity: Human
產(chǎn)朊假絲酵母Human SMOX(Spermine oxidase) ELISA KitAlias: SMOX(Spermineoxidase)Polyamineoxidase1|PAO-1|PAOh1ELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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