實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：膀胱癌細(xì)胞
來(lái)源：BSL-1

培養(yǎng)基：DMEM高糖90%，胎牛血清10%（1521/1531）

狀態(tài)：上皮細(xì)胞

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
洋川芎內(nèi)酯I(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-Alanamine Hydrochloride絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶蛋白抗體包裝25g

洋薊素;1,5-二咖啡?？鼘幩?標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： L-Histidine monohydrate monohydrochlorideHAUS5蛋白抗體包裝1ml

氧代川南亭堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： L-Homoarginine Hydrochloride 組織H4受體抗體包裝1ml

氧化白藜蘆(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： TPCKmRNA cap基轉(zhuǎn)移酶抗體包裝1ml

氧化白藜蘆-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷英文名稱： TPCK5’-三磷酸聚核苷酸抗體包裝1g

氧化白藜蘆-3'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷英文名稱： Ala-Gln 組氨酸三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體包裝25g

氧化槐定堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： H-Arg-OMe·2HCl狀腺促進(jìn)alpha鏈包裝5g

氧化槐果堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： D-Alaninamide hydrochlorideA型流感病H7N9凝集素抗體包裝1g

氧化苦參堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Fenticonazole Nitrate組蛋白去乙酰化酶3抗體包裝250mg

氧化前胡素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 1-Benzyl D-Glutamate人乙肝表面抗原抗體（包被）包裝5g

氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： D-Phenylalanine 腎損傷分子1抗體（型肝炎病受體1）包裝1ml

藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： D-Alanine組氨酸富含脯氨酸糖蛋白抗體包裝1ml

野百合堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： β-AlanineHER3受體抗體包裝100g

野黃芩苷(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： β-Alanine磷酸化HER3受體抗體包裝25g

野黃芩素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： D-Tryptophan磷酸化HER3受體抗體包裝100g
MGH-U1細(xì)胞炭黑曲霉Human ADAMTS4(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 4) ELISA KitAlias: ADAMTS4|ADAMTS2|ADMP-1|ADAM-TS4|ADAMTS-2|ADAM-TS4|ADAMTS-4|Aggrecanase1|adisintegrin-likeandmetalloprotease(reprolysintype)withthrombospondintype1motif|4|ADAMmetallopeptidasewiththrombospondintype1motif|4|Adisintegrinandmetalloproteinasewiththrombospondinmotifs4ELISAKitReactivity: Human

大腸埃希氏菌Human CHRM3(Muscarinic acetylcholine receptor M3) ELISA KitAlias: CHRM3|HM3|mAChRM3|cholinergicreceptor|muscarinic3|m3muscarinicreceptor|muscarinicacetylcholinereceptorM3ELISAKitReactivity: Human

類(lèi)芽孢桿菌屬Human KSR2(Kinase suppressor of Ras 2) ELISA KitAlias: KSR2|hKSR2(KinasesuppressorofRas2)ELISAKitReactivity: Human

亞細(xì)亞菌屬Human VCL(Vinculin) ELISA KitAlias: VCL(Vinculin)|MVCL|CMD1W|CMH15|MetavinculinELISAKitReactivity: Human

東方伊薩酵母Human VCAN(Versican core protein) ELISA KitAlias: VCAN(Versicancoreprotein)|CSPG2|GHAP|PG-M|Chondroitinsulfateproteoglycan2|WGN|Chondroitinsulfateproteoglycancoreprotein2|ERVR|Glialhyaluronate-bindingprotein|Largefibroblastproteoglycan|WGN1|versican|versicanproteoglycanELISAKitReactivity: Human

根瘤菌Human KRT17(KeRatin, type I cytoskeletal 17) ELISA KitAlias: CK-17|KRT17(CytokeRatin17)|K17|KeRatin-17|39.1|CytokeRatin-17|KeRatin|typeIcytoskeletal17ELISAKitReactivity: Human

青紫鏈霉菌Human TNNT1(Troponin T, slow skeletal muscle) ELISA KitAlias: TNNT1(TroponinTType1|SlowSkeletal)|TNT|TnTs|sTnT|SlowskeletalmuscletroponinT|TroponinT|slowskeletalmuscleELISAKitReactivity: Human

北方蜜環(huán)菌Human S100A9(Protein S100-A9) ELISA KitAlias: S100A9(S100CalciumBindingProteinA9)|CalgranulinB|MRP-14|CAGBMigRationinhibitoryfactor-relatedprotein14|Calgranulin-B|CalprotectinL1Hsubunit|CGLB|L1AG|LIAG|MRP14LeukocyteL1complexheavychain|NIF|P14|proteinS100-A9ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。