操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
冰凍切片組織TUBULIN蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次葡聚糖T4

石蠟切片組織TUBULIN蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次人腫瘤血管生長因子（TAF）ELISA試劑盒, TAF ELISA kit

載玻片細胞TUBULIN蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次人視網(wǎng)膜母瘤抑制蛋白（pRB）ELISA試劑盒, pRB ELISA kit

冰凍切片組織TUBULIN蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次人阿米巴（Amebiasis）ELISA試劑盒,Amebiasis ELISA

石蠟切片組織TUBULIN蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次人組蛋白H2b（histon-H2b）ELISA試劑盒,histon-H2b ELISA

細胞TUBULIN蛋白表達比色法定量檢測試劑盒10/50 次人果糖1,6二磷酸醛縮酶（FDA）ELISA試劑盒,

細胞TUBULIN蛋白表達熒光定量檢測試劑盒10/50 次人甘露糖（MN）ELISA試劑盒,

TUBULIN蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次小鼠補體片斷3a（C3a）ELISA試劑盒,

TUBULIN蛋白共沉淀分析試劑盒5次大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1（PAI-1）ELISA試劑盒,

TUBULIN蛋白表達ELISA定量檢測試劑盒25次豬生長釋放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）ELISA試劑盒,

細胞MAPK蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒10/20次植物維生素A（VA）ELISA試劑盒,

載玻片細胞MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次血瓊脂基礎(chǔ)   用于副溶血性弧菌的溶血試驗

冰凍切片組織MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次印 度墨汁炭疽桿菌檢測用配套試劑

石蠟切片組織MAPK蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次BOC-D-脯氨酸

載玻片細胞MAPK蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次硫酸-5-羥色肌酐
木質(zhì)部難養(yǎng)**PCR試劑盒phospho-MEK1 (Thr286)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體壬酸 98%

Phospho-MEK1/2 (Ser217/221)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2抗體1-辛 99%

Phospho-MEK1/2 (Ser221)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2抗體1-辛 97%

phospho-ERK1/MAPK-1/2(Thr183/185)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體正辛酸 ≥98%, FG

phospho-ERK1(Thr202/Tyr204)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體1-辛 ≥92%, FCC

ERK1/2(p44/42 MAPK)  絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體1-辛 natural, ≥92%, FCC

phospho-p44/42 MAPK (Thr202/Tyr204)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體丁酸酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)

phospho-ERK1(Thr202/Thr204)+ERK2(Thr183/Tyr185)  磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體丁酸酯 99%

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