操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線(xiàn)粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€(xiàn)粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線(xiàn)粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線(xiàn)粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線(xiàn)粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專(zhuān)一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒片姜黃

細(xì)胞色素P450亞酶2D6（DEXTROMETHORPHAN）活性20次多藥耐藥相關(guān)蛋白1抗體流式組化

高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒胸腺肽 α-1抗體流式組化

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶2D6（DEXTROMETHORPHAN） 活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次L-酪氨酸二鈉鹽

細(xì)胞色素P450亞酶3A4（TESTOSTERONE）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次L-苯丙氨酸乙酯鹽酸鹽

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶3A4（TESTOSTERONE）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次N-苯甲酰-L-酪氨酰乙酯

細(xì)胞色素P450亞酶2C8（PACLILAXEL）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次D-果糖-1，6-二磷酸三鈉

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶2C8（PACLILAXEL）活性20次4-硝基乙酰苯

高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒聚乙二醇600

細(xì)胞色素P450亞酶2C18（DICLOFENAC）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次次亞磷酸鈉

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶2C18（DICLOFENAC）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次月桂酸甲酯

細(xì)胞色素P450亞酶4A1（LAURIC ACID）活性高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒20次乙酸銀

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶4A1（LAURIC ACID）活性20次丹參酮ⅡA磺酸鈉

高效液相色譜法（HPLC）定量檢測(cè)試劑盒甘草苷

細(xì)胞色素P450亞酶4F3B（LEUKOTRINE B4）活性20次卡維丁
川貝母染料法PCR試劑盒Phospho-C/EBPbeta (Ser105) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體IgG正酸 98%

Phospho-C/EBPalpha (Ser21) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 抗體IgG3-喹啉酸頻哪酯 95%

Phospho-C/EBPalpha (Thr222/226) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷酸化轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP α 抗體IgG2,3,4-三氟苯酸 96%

C/EBP Beta/FITC  熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體IgG4-(三氟甲基)苯酸 98%

Phospho-C/EBPbeta (Thr235) /FITC  熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子C/EBP β抗體IgG4-(叔丁氧基羰基)苯酸 95%

PBK/TOPK/FITC  熒光素標(biāo)記PDZ連接激酶/T-LAK源蛋白激酶抗體IgG4-(叔丁基二甲硅氧基)苯酸 97%

Phospho-PBK/TOPK (Thr9) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化PDZ連接激酶/T-LAK源蛋白激酶抗體IgG4-(2-四氫吡喃氧基)苯酸 96%

Cecropin/FITC  熒光素標(biāo)記肽/天蠶素抗體IgG4-(硅基)苯酸 97%

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