產(chǎn)品名稱：人冠狀病毒 HKU1 熒光PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-01P99964
操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
Ai-OPN/FITC 熒光su標(biāo)記骨橋蛋白抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-rat IgM/HRP 辣根過氧化物mei標(biāo)記兔抗大鼠IgMMulti-class aibodies： 0.1ml

嗜鉻粒suB抗體 Ai-CGB 0.2ml

Rabbit Ai-horse IgM/APC APC標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FAM135B 英文名稱： FAM135B蛋白抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh PKC alpha 蛋白激meiC α抗體  0.2ml

Rabbit Ai-rat IgM/HRP 辣根過氧化物mei標(biāo)記兔抗大鼠IgMMulti-class aibodies： 0.1ml

Ai-HMGA1 (high mobility group AT-hook 1) 高遷移率族蛋白A1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-AAK1 AP2關(guān)聯(lián)激mei1抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-c-Jun(Thr91+Thr93) 磷suan化原癌基因c-Jun抗體  0.1ml

羊抗人IgG血清 0.5ml 國(guó)產(chǎn)

WNK4 英文名稱： WNK4抗體 0.1ml

DRD3 英文名稱： 多巴胺受體D3抗體 0.1ml

Ai-AAK1 AP2關(guān)聯(lián)激mei1抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

STAT5 英文名稱： 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5抗體 0.1ml

ELOVL6 英文名稱： 長(zhǎng)鏈脂肪suan延長(zhǎng)mei長(zhǎng)ELOVL6抗體 0.2ml

NK細(xì)胞抑制性受體3DL1抗體 Ai-CD158e/KIR3DL1 0.1ml

Ai-Iegrin alpha V/CD51 /FITC 熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠等整合suαV抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-GSK-3 Beta(Ser9) 磷suan化葡萄糖合成激mei3β抗體  0.1ml

CD45(LCA/gp180) CD45抗原(白細(xì)胞共同抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
人冠狀病毒 HKU1 熒光PCR檢測(cè)試劑盒十七碳suan（98%） 丁香酚 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：97-53-0 250mg體液D－乳suan比色法定量檢測(cè)試劑盒

隱色孔雀石綠（標(biāo)準(zhǔn)品） 惡唑菌tong 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：131807-57-3 2mlD－乳suan比色法定量檢測(cè)試劑盒

二十suan甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）伐滅磷 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：52-85-7 250mgL－乳suan比色法定量檢測(cè)試劑盒

suan甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）咪唑菌tong 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：161326-34-7 100mg組織L－乳suan比色法定量檢測(cè)試劑盒

甲suan甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品） 克線磷 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：22224-92-6 250mg血液L－乳suan比色法定量檢測(cè)試劑盒

亞硫suan氫鈉甲萘醌（標(biāo)準(zhǔn)品） 氯苯嘧啶 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：60168-88-9 250mg體液L－乳suan比色法定量檢測(cè)試劑盒

山崳suan甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品） 苯唑（解草唑） 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：114369-43-6 100mg總?cè)閟uan比色法定量檢測(cè)試劑盒

己suan甲酯（標(biāo)準(zhǔn)品）苯丁錫 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：13356-08-6 250mg組織總?cè)閟uan比色法定量檢測(cè)試劑盒