產(chǎn)品名稱：傷寒桿菌熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào):FS-01P99982
操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
Ai-ompF/FITC 熒光su標(biāo)記小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-human IgA/HRP 辣根過氧化物mei標(biāo)記兔抗人IgAMulti-class aibodies： 0.1ml

軟骨糖蛋白39抗體 Ai-CDR/YKL-40 0.1ml

Rabbit Ai-horse IgM/Cy7 Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 0.1ml

FAM29A 英文名稱： FAM29蛋白抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh PLAGL1/ZAC1 多型性腺瘤基因樣蛋白1抗體  0.2ml

Rabbit Ai-human IgA/HRP 辣根過氧化物mei標(biāo)記兔抗人IgAMulti-class aibodies： 0.1ml

MMP-20(matrix metalloproteinase 20) 基質(zhì)金屬蛋白mei20抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-Ankyrin G 錨定蛋白G抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-Beta-Catenin(Ser33/37) 磷suan化β 連環(huán)su蛋白抗體  0.1ml

HRP-Streptavidin工作液 12ml 進(jìn)口分裝

VGF 英文名稱： 神經(jīng)調(diào)節(jié)肽VGF抗體 0.1ml

DLGAP1 英文名稱： PSD95結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml

Ai-Ankyrin G 錨定蛋白G抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

Sca1 英文名稱： T細(xì)胞激活蛋白抗體 0.2ml

LPA1 英文名稱： 溶血磷脂suan受體蛋白1抗體 0.1ml

一種新的絲氨suan/蘇氨suan激mei家族成員的基因WNK4抗體 Ai-WNK4 0.2ml

Ai-TSHR()/FITC 熒光su標(biāo)記促甲狀腺su受體抗體(N端)IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-IKK beta(Ser733) 磷suan化KB抑制蛋白激meiβ抗體  0.1ml

TRA16 (Testicular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associated protein) 受體相關(guān)蛋白Multi-class aibodies： 0.5mg
傷寒桿菌熒光PCR檢測試劑盒標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=5～3%,tong)酞菌酯 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：10552-74-6 100mg全組織色suC氧化mei活性染色試劑盒

二磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=6～4%,tong)硝羥芐 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：1689-89-0 100mg凍切片色suC氧化mei和琥珀suan脫氫mei（Combined COX-SDH）雙mei活性染色試劑盒

三標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=5%) 諾氟 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：70458-96-7 100mg全組織色suC氧化mei和琥珀suan脫氫mei（Combined COX-SDH）雙mei活性染色試劑盒

三標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=6%)噠草伏標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)： 100mg凍切片NADH心肌黃mei和琥珀suan脫氫mei（Combined NADH-TR-SDH）雙mei活性染色試劑盒

烯唑(標(biāo)準(zhǔn)品)雙苯氟脲 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：116714-46-6 50mg全組織NADH心肌黃mei和琥珀suan脫氫mei（Combined NADH-TR-SDH）雙mei活性染色試劑盒

2,6-二氟(標(biāo)準(zhǔn)品)鈉鹽 新生霉su 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：1476-53-5 250mg凍切片suan性磷suanmei活性染色試劑盒

二氯乙Standard for GC,≥99.5%(GC)鄰二氯苯 標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)：95-50-1 1g全組織suan性磷suanmei活性染色試劑盒

二氯乙(標(biāo)準(zhǔn)品)標(biāo)準(zhǔn)品  CAS號(hào)： 82419-36-1 100mg凍切片乙酰脂mei活性染色試劑盒