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商品屬性：
貨號
規(guī)格
產(chǎn)品名稱
A-PJ1021-800Tx25μl
800Tx25μl
LAMP Loop DP-Probe (訂制品)
產(chǎn)品介紹：
LAMP Loop DP-Probe (訂制品)該 DP-Probe(DisPlaceable Probe)為鏈置換熒光探針，專用于LAMP 的熒光擴增。Loop DP-Probe 在搭配 HotStart Bst4.2 Basic 試劑時表現(xiàn)出極為出色的特異性，可以大幅降低非特異性擴增。LoopDP-Probe Pair 是將 Loop 引物進行改造（LF/B 任意一條均可），其由兩條標(biāo)記引物退火組成：熒光猝滅引物（5’IBFQ+Tail+Loop）和熒光報告引物（Tail 互補區(qū)+3’發(fā)光基團），其不發(fā)熒光。在 LAMP反應(yīng)中 Loop 引物滲入到“啞鈴”結(jié)構(gòu)，由擴增返回“啞鈴”延伸并置換游離的熒光報告引物，累積產(chǎn)生熒光信號。詳細的原理可參考文獻 PMID: 33626039。有經(jīng)驗的研究人員可根據(jù)參考文獻自行制備 LAMP Loop DP-Probe Pair，經(jīng)驗不足的人員可委托 來制備， 提供三種熒光標(biāo)記的探針。需要客戶提供 Loop 序列，并指明需要的熒光標(biāo)記（FAM/JOE/ROX）。
eLAMP DP-Probe 試劑的開發(fā)簡述：
1. 引物的粗篩選 無論是變色、試紙條、熒光法 eLAMP 試劑的開發(fā)，前期的測試過程， 推薦采用價格較低的液體 HotStart Bst4.2 SYBR Green試劑（進行粗篩選。通常篩選的引物為 3-5 組。10xeLAMP Mix：FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each.測試樣品：10e3、100、25、10Copies/管，NTC(16-32 重復(fù)) 2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl 10x ePrimer Mix 2.5 μl HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl 模板 DNA/RNA X μlddH2O 到總體積 25 μl置于 70°C 反應(yīng) 45min，1min 收集一次熒光信號。 良好的引物組具有 以 下 特 性 (Ct) ： 10e3copies =5-10min; 25copies <15min;10Copies<20min, NTC 均>40min. 以上實驗需要反復(fù)確認，以確 保核心引物的工作效率，否則重新篩選，再進行后續(xù)的其它測試。 2. Loop DP-Probe Pair 的制備 根據(jù)上述引物組的篩選情況，選取*佳引物組。在此基礎(chǔ)上改造LF 或 LB，改造哪一條效果更佳，必須經(jīng)過測試。下面以改造 LF為例進行說明。 通常提供 25x 的 LF DP-Probe Pair（或自行制備）。
注意：
（1）測試試劑更改為 HotStart Bst4.2 Basic 試劑。 （2）10xeLAMP Mix 引物濃度有調(diào)整。 10xeLAMP Mix：FIP/BIP=8 μM each; LB=4 μM；LF=3 μM. 2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl 10x ePrimer Mix 2.5 μl 25x LF DP-Probe Pair 1 μl HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl 模板 DNA/RNA X μl ddH2O 到總體積 25 μl 置于 70°C 反應(yīng) 45min，1min 收集一次熒光信號（注意根據(jù)探針熒光標(biāo)記，選取正確的熒光通道）。與 SYBR Green 結(jié)果相比來看，時間會滯后 1-3min。NTC 的控制會明顯提升。 此時可進一步做后續(xù)的其它項目測試。 3. 如???試劑凍干制備的需求可采用如下幾種方案： （1）(液體試劑)+PrimerMix 自行凍干（專業(yè)人員使用）。 （2）PrimerMix+(引物凍干劑)自行凍干，加入 (凍干球)。 （3）（HotStart Bst4.2），全程自行凍干（專業(yè)人員使用）。 （4）委托 進行全體系凍干。
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