原代細(xì)胞的培養(yǎng)：
(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項(xiàng)基本技術(shù)。
原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性，適宜用于敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
人角膜上皮細(xì)胞
商品屬性：
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組織來源
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眼角膜組織
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規(guī)格
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5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
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細(xì)胞分類
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人原代細(xì)胞
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培養(yǎng)條件
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氣相：空氣，95%；CO2，5%
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生長(zhǎng)特性
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貼壁
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細(xì)胞形態(tài)
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上皮細(xì)胞樣
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細(xì)胞簡(jiǎn)介：
人角膜上皮細(xì)胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能，分三層細(xì)胞層，外層即是上皮細(xì)胞；②角膜上皮細(xì)胞能參與先天性，能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng)；③角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段，常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長(zhǎng)因子和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人角膜上皮細(xì)胞經(jīng)PCK熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
公司正在出售的產(chǎn)品：
GHRHELISAKit
鵝骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa分析檢測(cè)試劑盒
OT/BGP ELISA kit
人單純皰疹病毒Ⅰ+Ⅱ型(HSVⅠ+Ⅱ)抗體(IgM)elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanherpessimplexvirusⅠ+Ⅱ(HSVⅠ+Ⅱ)antibody(IgM)ELISAkit
蛋白酶和磷酸酶抑制劑混合物（含EDTA）1ml
βAMYLOID蛋白表達(dá)ELISA定量檢測(cè)試劑盒
小鼠白介素6受體(IL6R)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠5核苷酸酶(5-NT)elisa檢測(cè)試劑盒
電壓門控鉀通道亞基Kv7.5抗體
KCNQ5
尾側(cè)型源轉(zhuǎn)錄因子1抗體
CDX1
人Alpha-D 生育酚/維生素E(Alpha-D TPL)elisa檢測(cè)試劑盒
體液基質(zhì)金屬抑制劑2（TIMP-2）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒
小鼠內(nèi)肽1(EM1)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠高敏甲狀腺素(u-T4)elisa分析檢測(cè)試劑盒
環(huán)指蛋白87
RNF87
鋅指蛋白741抗體
KLF3/ZNF741
Smad蛋白E3泛素連接酶2抗體 Anti-SMURF2
胰腺特異轉(zhuǎn)錄因子PTF1A抗體 Anti-PTF1A
外周蛋白2抗體 Anti-PRPH2
泛素蛋白連接酶M抗體 Anti-UBE2M
膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgG H&L
人角膜上皮細(xì)胞MAD4蛋白抗體
MAD4
12號(hào)染色體開放閱讀框24抗體
C12ORF24
原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機(jī)械分散法
特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
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