原代細(xì)胞的培養(yǎng)：
(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項(xiàng)基本技術(shù)。
原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
人食管成纖維細(xì)胞
商品屬性：
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組織來源
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食管
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規(guī)格
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5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
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細(xì)胞分類
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人原代細(xì)胞
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培養(yǎng)條件
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氣相：空氣，95%；CO2，5%
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生長特性
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貼壁
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細(xì)胞形態(tài)
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成纖維細(xì)胞樣
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細(xì)胞簡介：
人食管成纖維細(xì)胞分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動(dòng)物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過程中，食管的上皮細(xì)胞增殖，由單層變?yōu)閺?fù)層，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動(dòng)物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。食管的外膜，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，富有血管、管及神經(jīng)。主要包含食管成纖維細(xì)胞，成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管成纖維細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的人食管成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人食管成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
F0F1-ATP酶/ATP合成酶測(cè)試盒 20管/10樣
人超敏熱休克蛋白60(HSP-60)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞磷酸二酯酶1（PDE1）活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測(cè)試劑盒
小鼠糖皮質(zhì)受體α(GR-α)elisa分析檢測(cè)試劑盒
大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來源的神經(jīng)營養(yǎng)因子(GDNF)elisa分析檢測(cè)試劑盒
驢雌二醇(E2)elisa分析檢測(cè)試劑盒
冰凍切片游離毛地黃皂苷法（DIGITONIN）舒爾茨染色試劑盒
小鼠環(huán)磷酸腺苷(cAMP)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠胞外銅鋅超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD/SOD3)elisa分析檢測(cè)試劑盒
Avi-Tag 抗體 Avi-Tag
B細(xì)胞新型蛋白1抗體 BCNP
賴氨酸甲基化抗體 Methylated Lysine (di
methyl , mono methyl )
亮氨酸拉鏈抑癌蛋白2抗體 LZTS2
α-乳清蛋白單克隆抗體 alpha Lactalbumin
樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白抗體 OPCML
細(xì)胞角蛋白2e抗體 Cytokeratin 2e
細(xì)胞色素P450ⅡE1抗體 CYP2E1
KRBA2蛋白抗體 KRBA2
MAP激酶相互作用絲氨酸/蘇氨酸激酶1抗體 MNK1
熱休克蛋白-22抗體 HSP22
溶菌酶樣蛋白1抗體 LYZL1
干擾素-γ/IFN-γ抗體 IFN gamma
谷氨酸受體2B抗體 NMDAR2B
著絲粒蛋白T抗體 CENPT
腫瘤蛋白D53抗體 TPD52L1
大鼠膀胱腫瘤抗原(BTA)elisa檢測(cè)試劑盒
人食管成纖維細(xì)胞大鼠細(xì)胞色素P450(CYP450)elisa檢測(cè)試劑盒
細(xì)胞內(nèi)核酸氧化8-羥基鳥苷（8-OHG）比色法測(cè)定試劑盒
一氧化氮NO測(cè)試盒化學(xué)法測(cè)NO2－ 50管/24樣 比色法
可溶性總蛋白制備試劑盒
原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機(jī)械分散法
特點(diǎn):簡便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
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