原代細(xì)胞的培養(yǎng)：
(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項基本技術(shù)。
原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗、細(xì)胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞
商品屬性：
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組織來源
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羊膜
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規(guī)格
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5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
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細(xì)胞分類
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人原代細(xì)胞
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培養(yǎng)條件
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???相：空氣，95%；CO2，5%
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生長特性
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貼壁
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細(xì)胞形態(tài)
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成纖維細(xì)胞樣
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細(xì)胞簡介：
人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離自胎盤羊膜組織；胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的，是一個重要的器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。羊膜是胎盤的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長所需要的物質(zhì)，其光滑，無血管、神經(jīng)及，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能。
方法簡介：
實驗室分離的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞采用胰蛋白酶 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)CD44熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
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糖代謝相關(guān)蛋白1抗體
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腫瘤易感基因101蛋白抗體 Anti-Tsg101
纖維蛋白溶酶原抗體 Anti-Plasminogen
緊密連接蛋白抗體 Anti-OCLN/Occludin
磷酸化5-脂氧合酶抗體 Anti-Phospho-5-Lipoxygenase(Ser663)
Cy3標(biāo)記的兔抗大鼠IgM
人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞ILK結(jié)合蛋白LIMS2抗體
LIMS2
比伐盧定（水蛭素類似物）抗體
Bivalirudin
原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。
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