原代細(xì)胞的培養(yǎng):
(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng),是建立細(xì)胞系的步,是一項(xiàng)基本技術(shù)。
原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長(zhǎng)特性,適宜用于敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無(wú)需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
人蛻膜成纖維細(xì)胞
商品屬性:
組織來源
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蛻膜組織
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規(guī)格
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5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
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細(xì)胞分類
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人原代細(xì)胞
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培養(yǎng)條件
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氣相:空氣,95%;CO2,5%
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生長(zhǎng)特性
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貼壁培養(yǎng)
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細(xì)胞形態(tài)
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長(zhǎng)梭形
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細(xì)胞簡(jiǎn)介:
蛻膜組織是內(nèi)膜間質(zhì)受蛻膜化誘導(dǎo)因子刺激而增殖和再分化形成的一種特殊組織,蛻膜成纖維細(xì)胞來源于妊娠期蛻膜,是母胎界面的主要功能細(xì)胞。不僅為胚胎發(fā)育提供營(yíng)養(yǎng),還能通過合成分泌多種細(xì)胞因子調(diào)節(jié)局部微環(huán)境。
細(xì)胞特性:
1) 細(xì)胞來源于人正常蛻膜組織。
2) 細(xì)胞鑒定:波形蛋白(Vimentin)熒光染色為陽(yáng)性。
3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式:長(zhǎng)梭形,不規(guī)則細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基:
我們推薦使用 delf原代 成纖維 細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為該細(xì)胞的培養(yǎng)基。
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谷氨酸受體調(diào)節(jié)蛋白2抗體 NARG2
果糖-2,6-二磷酸酶2/磷酸果糖激酶2抗體 PFKFB2/PFK2
線粒體轉(zhuǎn)錄終止因子樣蛋白MTERFD3抗體 MTERFD3
心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白1抗體 HAND1
白介素2抗體 IL-2
伴侶蛋白9抗體 CPNE9
CD53抗體 CD53
Cyclin A1相互作用蛋白抗體 PROCA1
磷酸化eIF4E結(jié)合蛋白抗體 phospho-eIF4EBP1(Thr70)
磷酸化磷脂酰肌醇激酶3催化亞單位3抗體 phospho-PIK3C3 (Ser164)
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原代細(xì)胞的分離方法:
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。
二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料,由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散,形成細(xì)胞懸液,可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機(jī)械分散法
特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大,而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀),應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng),使團(tuán)塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時(shí)再采用機(jī)械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散,制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液,接種培養(yǎng)后,細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。
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