離體蛙心灌流在ZL-620醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)的應(yīng)用

【離體蛙心灌流在ZL-620醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?

1．        學(xué)習(xí)離體蛙心的灌流方法。

2．        觀察鈉、鉀、鈣三種離子以及腎上腺素、乙酰膽堿等因素對(duì)心臟活動(dòng)的影響。

【離體蛙心灌流在ZL-620醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)原理】

作為蛙心起搏點(diǎn)的靜脈竇能按一定節(jié)律自動(dòng)產(chǎn)生興奮。因此，只要將離體失去神經(jīng)支配的蛙心保持在適宜的環(huán)境中，在一定時(shí)間內(nèi)仍能產(chǎn)生節(jié)律性興奮和收縮活動(dòng)；另一方面，心臟正常的節(jié)律性活動(dòng)有賴(lài)于內(nèi)環(huán)境理化因素的相對(duì)穩(wěn)定，所以改變灌流液的成分，則可以引起心臟活動(dòng)的改變。

【離體蛙心灌流在ZL-620醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

蟾蜍。

【離體蛙心灌流在ZL-620醫(yī)學(xué)信號(hào)采集處理系統(tǒng)的應(yīng)用實(shí)驗(yàn)器材】

蛙類(lèi)解剖手術(shù)器材、蛙釘、蛙板、林格液、滴管、蛙心夾、蛙心插管、微調(diào)固定器、鐵支架、滑輪、搪瓷杯、縫線、張力換能器、培養(yǎng)皿、ZL-620生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)。0.65%NaC1、2%CaCl2、1%KCl、1：10000腎上腺素溶液和1：10000乙酰膽堿溶液。

【方法和步驟】

1．離體蛙心制備

（1）取蟾蜍一只，搗毀腦和脊髓，將其仰臥固定于蛙板上。從劍突下將胸部皮膚向上剪開(kāi)（或剪掉），然后剪掉胸骨，打開(kāi)心包，暴露心臟

（2）在主動(dòng)脈干下方穿2根線。一條在左主動(dòng)脈上端結(jié)扎作插管時(shí)牽引用，另一根則在動(dòng)脈圓錐上方系一松結(jié)，用于結(jié)扎和固定蛙心插管。

（3）左手持左主動(dòng)脈上方的結(jié)扎線，用眼科剪在松結(jié)上方左主動(dòng)脈根部剪一小斜口，右手將盛有少許林格液的大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動(dòng)脈圓錐。當(dāng)插管冰到達(dá)動(dòng)脈圓錐時(shí)，再將插管稍稍后退，并轉(zhuǎn)向心室中央方向，在心室收縮期插入心室（圖2-12-2）。蛙心插管是否進(jìn)入心室，可根據(jù)插管內(nèi)林格液的液面是否能隨心室的舒縮而上下波動(dòng)來(lái)判斷。如蛙心插管已進(jìn)入心室，則將預(yù)先準(zhǔn)備好的檢結(jié)扎緊，并固定在蛙心插客的側(cè)鉤上，以免蛙心插管滑出心室。剪斷主動(dòng)脈左右分支。

（4）輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一根線在靜脈竇與腔靜脈交界處做一結(jié)扎，結(jié)扎線應(yīng)盡量下壓，以免傷及靜脈竇。在結(jié)扎線外側(cè)剪斷所有組織，將蛙心游離出來(lái)。

（5）用新鮮林格液反復(fù)換洗蛙心插管內(nèi)含血的林格液，直至蛙心插管內(nèi)無(wú)血液殘留為止。此時(shí)離體蛙心已制備成功，可供實(shí)驗(yàn)。

2．實(shí)驗(yàn)裝置                        

（1）按圖2-12-3將蛙心插管固定在鐵支架上，用蛙心夾在心室舒張期夾住心尖，并將蛙心夾的線頭通過(guò)滑輪連至張力換能器的應(yīng)變?nèi)旧?，此線應(yīng)有一定的緊張度。

（2）按圖2-12-3連接線路，張力換能器輸出線接**通道（亦可選擇其他通道）。

 （3）打開(kāi)計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)ZL-620生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)。點(diǎn)擊菜單“實(shí)驗(yàn)/常用生理學(xué)實(shí)驗(yàn)”，選擇“離體蛙心灌流”。ZL-620放大器和采樣參數(shù)如表2-12-1所示。

表2-12-1  ZL-620放大器和采樣參數(shù)表

3．實(shí)驗(yàn)觀察

（1）描記正常的蛙心搏動(dòng)曲線，注意觀察心中頻率、心室的收縮和舒張幅度。

（2）把蛙心插管內(nèi)的林格液全部更換為等量的0.65%NaCl溶液，觀察心臟活動(dòng)及曲線變化。當(dāng)效應(yīng)明顯時(shí)應(yīng)及時(shí)吸出灌流液，用新鮮林格液反復(fù)換洗數(shù)次，待曲線恢復(fù)正常后做下一步。

（3）滴入2%CaCl2溶液1~2滴，觀察及換液方法同上。

（4）滴入1%KCl溶液1~2滴，觀察及換液方法同上。

（5）滴入1：10 000的腎上腺素溶液1~2滴，觀察及換液方法同上。

（6）滴入1：10 000的乙酰明堿溶液1~2滴，觀察方法同上。

【注意事項(xiàng)】

1．        制備蛙心標(biāo)本時(shí)，勿傷及靜脈竇。

2．        上述各實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目一旦出現(xiàn)作用應(yīng)立即用新鮮林格液換洗，以免心肌受損，而且必須待心跳恢復(fù)正常后方能進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)。

3．         蛙心插管內(nèi)液面應(yīng)保持恒定，以免影響結(jié)果。

4．         滴加藥品和換取新鮮林格液，必須及時(shí)做標(biāo)記，以便觀察分析。

5．         吸新鮮林格液和吸蛙心插管內(nèi)溶液的吸管應(yīng)區(qū)分專(zhuān)用，不可混淆使用。同時(shí)，吸管不能接觸蛙心插管壁，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

6．         化學(xué)**作用不明顯時(shí)，可再適量滴加，密切觀察**劑量添加后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】

     將實(shí)驗(yàn)結(jié)果打印輸出，并加注說(shuō)明。

【思考題】

1．         上述各種因素對(duì)心臟收縮活動(dòng)有什么影響？為什么？

2．         林格液何以能維持蛙心搏動(dòng)？哺乳動(dòng)物心臟離體后是否也能搏動(dòng)？