竹節(jié)參總皂苷對不同時間段腦出血模型大鼠腦損傷的保護作用

閔靜1，嚴菊華1，敖明章2( 1. 湖北職業(yè)技術學院醫(yī)學院，湖北孝感432000; 2. 華中科技大學生命科學與技術學院)

摘要: 目的研究竹節(jié)參總皂苷( TSPJ) 對腦出血大鼠腦損傷不同時間段的影響。方法采用膠原酶法制備腦出血動物模型，將48 只大鼠隨機分為假手術組、模型組、TSPJ 低、高劑量組共4 組，每組12 只; 造模后6h 灌胃給藥，每12h 1 次，于造模后12、72h 測各組大鼠腦組織含水量，超氧化物歧化酶、丙二醛含量，IL-6、TNF-α 水平。結果與模型組比較，72h 高劑量TSPJ 組腦組織含水量減少，超氧化物歧化酶活性增高，丙二醛含量下降，IL-6、TNF-α 水平下降，12h 時TSPJ 高劑量組超氧化物歧化酶活性增高，TNF-α 下降; 丙二醛、IL-6 含量變化不明顯。結論TSPJ 能減輕出血性腦損傷，對受損腦組織發(fā)揮保護作用，且有時間依賴性。

關鍵詞: 竹節(jié)參總皂苷; 腦出血; 腦水含量

中圖分類號: Ｒ965. 1 文獻標識碼: A 文章編號: 2095-4646( 2014) 03-0194-03

腦出血( intracerebral hemorrhage， ICH) 是一種急癥重癥，嚴重威脅人們的健康; 腦出血后血凝塊回縮，血腦脊液屏障的破壞，血腫周圍缺血，組織炎癥反應等因素都可造成腦組織的水腫，從而引起功能障礙［1］。竹節(jié)參總皂苷( total saponins ofpanax japonicus，TSPJ) 具有**化瘀作用，本實驗通過觀察12h 和72h 兩個時間段TSPJ 對腦出血大鼠腦組織超氧化物歧化酶( SOD) 活性、丙二醛( MDA) 及IL-6、TNF-α 含量的影響，研究其不同時間段的效果及機理。

1 材料與方法

1． 1 實驗動物

健康雄性SD 大鼠，體質量為240 ～ 280g，清潔級，由湖北省動物實驗中心提供，合格證號:SCXK( 鄂) 2011 ～ 012; 分組: 大鼠隨機分為4 組，假手術組、模型組、TSPJ 低劑量組( 100mg /kg) 、TSPJ 高劑量組( 200mg /kg) ，每組12 只，分別觀察術后12、72h 兩個時間點各項指標。TSPJ 組術后6h 灌胃給藥，假手術組及模型對照組灌胃等量生理鹽水，以后12h /次TSPJ 組灌胃給藥，而假手術組及模型對照組灌胃等量生理鹽水，各組飼養(yǎng)條件相同。

1． 2 藥品與儀器

竹節(jié)三七樣品采自湖北恩施，采用醇提取法，**稱取樣品50mg，定容于50ml 容量瓶，**吸取樣品液2ml，置50ml 容量瓶中定容，搖勻。由華中科技大學生命科學院天然產物實驗室通過標準品檢測，TSPJ 凈含量為33． 3%，用前配成懸濁液，置4℃ 冰箱保存?zhèn)溆谩＂餍湍z原酶，美國Sigma公司產品; 注射用尿激酶( 批號03290，南京南大藥業(yè)有限責任公司) ，配制成200 IU / L 的溶液;SOD 試劑盒、MDA 試劑盒( 上海恒遠生化試劑有限公司) ; IL-6、TNF-α 試劑盒，北京福瑞生物工程有限公司。儀器: 大鼠腦立體定位儀，微量注射儀; 電子天平 ，德國生產; GF-D200半自動生化分析儀， 8021 離心機 ; 752 分光光度儀。

1． 3 模型制備

參照Ｒosenberg 等［2］的方法，根據(jù)包新民大鼠腦立體定位圖譜［3］確定尾狀核的位置: 術前禁食，自由飲水，大鼠經****( 0． 1ml /100g) 腹腔麻醉俯臥位固定于立體定位儀上，據(jù)圖譜調整立體定位儀于注射點，頭皮正中常規(guī)**后矢狀位切開約1． 5cm，暴露前囟點，用骨鉆鉆顱打孔( 直徑約1mm) ，用微量進樣器吸取膠原酶2ml，迅速插入已鉆好孔內，進針5mm，注射時間不少于15min，留針10min 后緩慢退針，鉆孔用骨蠟封閉，局部**后，縫合皮膚，假手術組注射2ml 的生理鹽水，手術過程同出血組。

1． 4 檢測方法

1． 4． 1 腦組織含水量測定

分別于術后第12h 及第72h，過量麻醉大鼠，快速斷頭取腦組織，用濾紙吸干腦表面液體和血跡，小塑料封口袋密閉全腦，電子天平稱濕重，然后放入80℃烤箱中，72h 后稱干重。腦含水量計算公式: ［( 濕重－ 干重) /濕重］× 100%。

1． 4． 2 SOD 活性、MDA 含量測定

各組動物再分兩組分別于術后第12h 及第72h，過量麻醉大鼠，快速斷頭取腦組織，微凍硬后取出，置薄膜隔開的干冰上，分離出血側皮質及基底節(jié)，4℃下用預冷的勻漿介質制備成10%的腦勻漿置3000r /min 離心15min 后，取上清液按試劑盒方法操作。SOD 活性測定: 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統(tǒng)產生超氧陰離子自由基，進而氧化羥胺形成亞硝酸鹽，在550nm 處測其吸光度，通過公式計算。MDA 含量的測定: 通過過氧化脂質降解產物中的MDA 可與硫代***酸縮合，形成紅色產物，在532nm 測吸光度。

1． 4． 3 IL-6、TNF-α 測定

分別于術后第12h 及第72h 手術，取腦勻漿上清液，按放免試劑盒說明書，加入分離劑后充分混勻，放室溫20min，離心，吸上清，生化分析儀上測放射性，以B /T 計算NSB、SO 結合百分率，以B /B0 計算標準及待測樣品結合百分率，并查出樣品值。

1． 5 統(tǒng)計方法

以SPSS 17． 0 統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)以珋x ± s 表示，各組間比較采用t 檢驗，P ＜ 0. 05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2． 1 TSPJ 對腦水腫的影響

從表1 可見， 12h 時TSPJ 組腦出血后的腦組織含水量無明顯影響， 72h 時高劑量組TSPJ 組腦出血后的腦組織含水量減少，和模型組比較有顯著性差異( P ＜ 0． 05) 。