所謂的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 就是通過(guò)對(duì) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)中，引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行，PCR 反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線。

1、如果有標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算。

2、一般都是相對(duì)量，則用delta delta CT方法來(lái)計(jì)算。

3、舉例如下：對(duì)照組基因A的CT值為20， 內(nèi)參（比如βactin)CT值15。實(shí)驗(yàn)組基因A CT值18，內(nèi)參CT值14。

4、首先算加樣量：delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是說(shuō)實(shí)驗(yàn)組的加樣量是對(duì)照組的2倍。基因A: delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是說(shuō)基因A的量在實(shí)驗(yàn)組是對(duì)照組的4倍。但是由于加樣量是2倍，所以4處以2=2，后的相對(duì)量是2倍。

5、幾點(diǎn)注意：必須確定擴(kuò)增的特異性，只有相同目標(biāo)的CT值才能相減（擴(kuò)增效率有可能不同），2的某次方只是理論值，實(shí)際擴(kuò)增效率低于2，不用Syber Green。