ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價(jià)結(jié)合，此種結(jié)合不會(huì)改變抗體的免yi 學(xué)特性，也不影響酶的生物學(xué)活性。此種酶標(biāo)記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發(fā)生特異性結(jié)合。滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型變成有色的氧化型，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。因此，可通過(guò)底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定有無(wú)相應(yīng)的免yi 反應(yīng)，顏色反應(yīng)的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應(yīng)可通過(guò)ELISA檢測(cè)儀進(jìn)行定量測(cè)定，這樣就將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合起來(lái)，使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測(cè)方法。

注意事項(xiàng)：

1、操作前應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)的物理參數(shù)有充分的了解，如環(huán)境溫度(保持在18 C~25℃)、反應(yīng)孵育溫度和孵育時(shí)間、洗滌的次數(shù)等，要先查看水育箱溫度，是否符合要求。

2、正確使用加樣器加樣器應(yīng)垂直加入標(biāo)本或試劑，避免刮擦包被板底部。加樣過(guò)程中避免液體外濺，血清殘留在反應(yīng)孔壁上，加樣器吸頭要清洗干凈，避免污染，加樣次序要與說(shuō)明書(shū)一致，否則可導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差。

3、手工洗板加洗液時(shí)沖擊力不要太大，洗滌次數(shù)不要超過(guò)說(shuō)明書(shū)推薦的洗滌次數(shù)，洗液在反應(yīng)孔內(nèi)滯留的時(shí)間不宜太長(zhǎng)。不要使洗液在孔間竄流，造成孔問(wèn)污染，導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性。

4、要保證加液量一致 我們?cè)谑褂脮r(shí)感覺(jué)滴瓶加液不如加樣器好，滴瓶不易控制加液量不準(zhǔn)，造成顯色不統(tǒng)一，判斷錯(cuò)誤。

5、顯色液量不可過(guò)多 加樣的工作環(huán)境不能處于陽(yáng)光直射的環(huán)境下，加顯色系統(tǒng)后要避光反應(yīng)，顯色液量不能過(guò)多，以免顯色過(guò)強(qiáng)。

6、試劑的影響因數(shù):應(yīng)選用有*批準(zhǔn)文號(hào)，質(zhì)量靠得住的產(chǎn)品，不能圖便宜，忽視質(zhì)量保證。試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，在使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。試劑開(kāi)啟后要在一周內(nèi)用完，剩余的試劑下次用時(shí)應(yīng)先檢查是否變質(zhì)，，顯色劑如被污染變色將造成全部顯色，導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果。過(guò)期的試劑不宜再用，若別無(wú)選擇，應(yīng)做好雙份質(zhì)控品的監(jiān)測(cè)，確保結(jié)果的可靠性。