本試劑盒即開即用,用戶只需要提供樣品DNA模板,引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高,提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品,特異性高,引物是根據(jù)指標(biāo)DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他微生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng),既可用于定性檢測,又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí),本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。
使用方法:
試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))
稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液,用帶芯槍頭,下同。
3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,??4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。