儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結(jié)果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

大鼠小神經(jīng)膠質(zhì)細胞(RM)(5×105)赤芝酸ELucidenic acid E質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥97%

非洲綠猴腎細胞;CV-1利克飛龍Licofelone質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

KM小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤瘤株;G422 小鼠膀胱成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL靈芝1酸CGanoderenic acid C質(zhì)量規(guī)格：＞95.0%（HPLC）

細胞名稱 種屬生物胞素Biocytin質(zhì)量規(guī)格：>98%,進分

VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細胞裂解液 (陽性對照) PU-H71PUH71質(zhì)量規(guī)格：>98%,HSP90抑制劑
CM-M038小鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL駱駝蓬堿;駱駝蓬靈;哈梅靈(標準品)Harmaline;Dihydroharmine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞KC-5103Tifluadom/KC-5103質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0910 成纖維細胞完全培養(yǎng)基 100mL鹽酸伐昔洛韋/鹽酸萬乃洛韋Valacyclovir HCl質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

前列腺平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)鹽酸伐昔洛韋/鹽酸萬乃洛韋（標準品）Valacyclovir HCl質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

CD200 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD200 人細胞裂解液 (陽性對照) 維庫溴銨Vecuronium Bromide質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
POSTN Others Human 人 OSF2 / POSTN 人細胞裂解液 (陽性對照) 1-基-8-奈酚-3,6-二磺酸鈉shēng huà shì jì容量：25克

腦動脈血管平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)3-本基-1-炳醇;γ-本炳醇;輕化肉桂醇;3-本炳醇;γ-羌基炳基本 3-Phqnyl-1-propcnol;xy7nocinncMic clcohol;xy7nocinncMyl clcohol;3-Phqnylpropcnol;3-Phqnylpropyl clcohol;γ-xy7noxypropylbqnzqnq 1-97-4

FCGR4 Others Mouse 小鼠 CD16-2 / FCGR4 人細胞裂解液 (陽性對照) β-DPNHβ-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸二鈉100克重組體，500u/mg

VERO 非洲綠猴腎細胞MOPSwo7iumSALTMOPS, Na白色粉末RTsigma

貓腎細胞;F818002-74-2切片石蠟Paraffin with ceresin
腸微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)L-ASCORBICACID,FREEACID抗壞血酸(維生素C)ACS級白色精細結(jié)晶粉末RTsigma

C1QB Others Human 人 C1QB / C1qB 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 酰氧1醋 ccqtoxy7noxcMic ccid 246-88-3

人博卡病毒試劑盒熒光PCR法人癌細胞;MCF 7B羥基1灰石 (高流速) Hydroxyapatite (fast flow) 1306-06-5 10G 分離試劑

MDA-MB-468細胞，癌細胞 人鼻咽癌細胞,HNE2細胞 CL-0283Ishikawa(人內(nèi)膜癌細胞)5×106cells/瓶×2metxylEosin甲基曙紅紅色粉末RTsigma

中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO-HCV-NS5A(糖原IX)

產(chǎn)品留言

標題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗證碼

點擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細聯(lián)系方式!