PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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腦膜膿毒黃桿菌試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63333
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4B 人肝癌細胞，SK-HEP-1細胞 95-D(高轉移肺癌細胞)醋酸戈舍瑞林 質量規(guī)格：BR,>98%Goserelin
Acetate
人骨肉瘤細胞;U-2 OS [U2OS;U2-OS;U-2OS]醋酸亮丙瑞林 質量規(guī)格：BR,>98%Leuprolide Acetate
TDGF1 Others Human 人 TDGF1 / CRGF 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸地塞米質量規(guī)格：>98%,BP,BR,可用于細胞培養(yǎng)Dexamethasone
Acetate
CM-H030人外周血白細胞完全培養(yǎng)基100mL醋酸地塞米（標準品）質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Dexamethasone
Acetate
MAPK12 Others Human 人 ERK3 / MAPK12 / P38-gamma 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 甲氧芐啶質量規(guī)格：>99.5%,超,BP2010,BR,可用于細胞培養(yǎng)Trimethoprim
CTSZ Others Mouse 小鼠 CTSX 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸利多卡因(標準品) HCl質量規(guī)格：含量測定
犬腎細胞;MDCK(NBL-2)L-胱氨酸鹽酸鹽L-Cystine 質量規(guī)格：>98%,BR
IL12A & IL12B Others Mouse 小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細胞裂解液 (陽性對照) L-半胱氨酸L-Cysteine質量規(guī)格：含量98~101%,BR
JAR 人胎盤絨毛癌細胞L-半胱氨酸(標準品)L-Cysteine質量規(guī)格：>98%,標準品
RWPE-1人正常前列腺上皮細胞 RWPE-1 of normal human
prostate epithelial cells K-SFM+0.05mg/ml BPE+5ng/ml EGFL-半胱氨酸鹽酸鹽，一水L-Cysteine monohydrate質量規(guī)格：>99%,BR
H22 小鼠肝癌細胞2-氯蒽(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)2-Chloroanthracene
DSC2 Others Human 人 DSC2 / Desmocollin-2 人細胞裂解液 (陽性對照) 9,10-二氯蒽(>96.0%(GC))質量規(guī)格：>96.0%(GC)9,10-Dichloroanthracene
人正常肝細胞;L-021,5-二溴蒽(>97.0%(GC))質量規(guī)格：>97.0%(GC)1,5-Dibromoanthracene
HA Others H5N2 甲型流感 H5N2 (A/osich/South
Africa/AI1091/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 1,8-二蒽(>98.0%(GC))質量規(guī)格：>98.0%(GC)1,8-Diiodoanthracene
NCI-H292 人肺癌細胞(結轉移)9-酮基利培酮質量規(guī)格：美國進口9-Keto Risperidone
EB病毒轉化的人B細胞;HH-16Tetraterbiumheptaoxide氧化鋱500克CP，97.5%
RM-1細胞，前列腺癌細胞 人胚胎腸粘膜細胞,CCC-HIE-2細胞 恒河猴腎細胞;RM-21,3,5-三溴苯 1,3,5-Tribromobenzene,98% 626-39-1 5G 通用試劑
大鼠腦膠質瘤細胞;C6務二醋;膠醋 Glutcric
ccid;n-Pyrotcrtcric ccid;Pqntcnqdioic ccid;Diccrboxylic ccid C5 110-94-1
SCARB1 Others Mouse 小鼠 SCARB1 / CD36L1 / CLA-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
VISIGLOPLUSHRPCHEMILUMINESCENTSUBSTRATEKIT辣根酶化學發(fā)光底物試劑盒超級COLDsigma
成纖維細胞培養(yǎng)基FM-sf-prf呋(*)Furan
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
腦膜膿毒黃桿菌試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。
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