PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結(jié)果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

小鼠顆粒細胞MGC超細高嶺土(1250(11um))質(zhì)量規(guī)格：1250(11um)Kaolin(superfine)

猴腎細胞;vero IgRCD4- 慢性髓原白血病，K562細胞 BxPC-3(原位胰腺腺癌細胞)超細高嶺土(3000(5um))質(zhì)量規(guī)格：3000(5um)Kaolin(superfine)

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞;KMY0923磺胺醋酰鈉 SA-NA（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品Sufacetamide

CFH Others Human 人 CFH / Compleme Factor H 人細胞裂解液 (陽性對照) 舒必利質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,EP6.0Sulpiride

CM-R077大鼠血管外膜成纖維細胞完全培養(yǎng)基100mL他達那非質(zhì)量規(guī)格：>99%Tadalafil
EC9706 食管癌表戈米辛O（標準品）Epigomisin O質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標準品

SW620人結(jié)腸癌細胞 SW620 human colon cancer cells L-15+10%FBS琥珀酸鈉（標準品）Hydrocortisone  succinate質(zhì)量規(guī)格：含量測定

TNFSF8 Protein Rat 重組大鼠 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 標簽)回拉西坦;茴拉西坦（標準品）Aniracetam質(zhì)量規(guī)格：含量測定

人胚胎絨毛細胞(HAF)(1×106 ) 細胞名稱 種屬卡絡磺鈉（標準品）Carbazochrome  sulfonate質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人喉癌上皮細胞;Hep-2卡絡磺鈉Carbazochrome  sulfonate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
恒河猴肺細胞;RM-L1 人子細胞，HT-3細胞 SK-BR-3(腺癌細胞)TG101209質(zhì)量規(guī)格：>98%，選擇性JAK2抑制劑TG-101209;TG 101209

人骨肉瘤細胞;HOS鹽酸阿扎司瓊（標準品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Azasetron

REG3G Others Human 人 REG3G / PAP1B 人細胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸普萘洛爾（標準品）質(zhì)量規(guī)格：溶出度檢查Propranolol

胃粘膜上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)美他多辛（標準品）質(zhì)量規(guī)格：HPLC法含量測定Metadoxine

STX8 Others Human 人 STX8 / Syaxin 8 人細胞裂解液 (陽性對照) 促性腺釋放相關(guān)蛋白（1-13），人質(zhì)量規(guī)格：>95%,BRGn-RH Associated Peptide (GAP) (1-13), human
人成骨肉瘤細胞;MG-63 大鼠小腸隱窩上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL鄰本二羧酸-二-C8-10支鏈烷基酯，英文名或英文縮寫：DINP，級別：AR，98%，規(guī)格：25克

骨骼肌細胞生長添加物SkMCGS碳醋輕銨 cmmonium biccronctq 1066-33-7

VEGFA Others Human 人 VEGF121b / VEGF-A 人細胞裂解液 (陽性對照) 鱗醋二正丁酯 Dibutyl phosphctq 107-66-4

皮疽諾卡菌試劑盒熒光PCR法人癌細胞;MDA-MB-435S元素光譜粉shēng huà shì jì容量：RT10克

CNE-2Z細胞，人鼻咽癌母系細胞 小鼠骨髓瘤細胞,SP2/0細胞 恒河猴腎細胞;RM-1Brij-35 200g/5kg原裝 Sigma P1254