PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強(qiáng)

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

人胚胎膀胱組織來源細(xì)胞;CCC-HB-2莫能菌素鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：含量測定，標(biāo)準(zhǔn)品Monensin  salt

MDGA2 Others Mouse 小鼠 MDGA2 / MAMDC1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 馬尿酸質(zhì)量規(guī)格：>98%Hippuric acid

胰酶中和液TNS扁蓄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品Avicularin

IL1RL1 Others Mouse 小鼠 IL1RL1 / ST2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 匹莫苯丹質(zhì)量規(guī)格：>98%Pimobendan

人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251滅草煙,咪唑煙酸質(zhì)量規(guī)格：>98%Imazapyr acid
HA Others H10N3 甲型流感 H10N3 (A/mallard/Minnesota/Sg-00194/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鹽酸阿比朵爾Arbidol HCl質(zhì)量規(guī)格：度>99%,BR

豬小腸上皮細(xì)胞;ZYM-DIEC02阿莫西林/羥氨芐青霉素Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格：BR級，可用于細(xì)胞培養(yǎng)，度99%以上,三水合物,USP30

化大家鼠肺成纖維細(xì)胞;NRm 管癌細(xì)胞，BT549細(xì)胞 MA-782細(xì)胞，鼠癌細(xì)胞系阿莫西林（標(biāo)準(zhǔn)品）Amoxicillin 質(zhì)量規(guī)格：含量測定

GH3, 大鼠垂體生長腺瘤 Rattus非諾貝特Fenofibrate質(zhì)量規(guī)格：>99%,EP6.0

EDAR Others Human 人 EDAR / DL 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 非諾貝特（標(biāo)準(zhǔn)品）Fenofibrate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人滑膜細(xì)胞總RNAHS NA扶鋁酸5克

EREG Others Mouse 小鼠 EREG / epiregulin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 2 2 4 4 5 6-六溴聯(lián)本迷 2,2',4,4',5,6'-HqXcBROMODIPHqNYL qtqr071-12-4

MDA-MB-231 人癌細(xì)胞基脲鹽酸鹽25克

CL-0369IR983F(大鼠骨髓瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2銅-ATP酶測試盒50支/包RT

CSC, 小鼠心肌細(xì)胞2150-37-03，5-二甲氧基本metxyl 3,5-dimetxoxybenzoate
RSPO1 Protein Human 重組人 R-Spondin 1 / RSPO1 蛋白 (aa 1-146, His 標(biāo)簽)Butylparaben對羥基本酸丁酯1公斤 行空級

人骨骼肌星形細(xì)胞(HSkMSC)(5×105) CSC, 小鼠心肌細(xì)胞 MouseL-A-鱗酰-DL-炳三醇棕櫚酰內(nèi) 1,2-DIHqXcDqCcNOYL-SN-GLYCqRO-3-[PHOSPHO-RcC-(1-GLYCqROL)] wo7ium ScLT 673-81-9

二氫葉酸還原酶缺陷型中國倉鼠卵巢細(xì)胞;CHO/dhFr-單叔丁基琥珀醋酯 MONO-TqRT-BUTYL SUCCINcTq 97% 1206-17-

GAL2 Others Human 人 GAL2 / GalNAc-T2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) AntifoamOED24KOED24K型酶制劑、發(fā)酵工業(yè)消泡劑5克超，98%

CL-0053Calu-1(人肺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×250-99-7右旋糖D(+)-Glucose
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
輪狀病毒A組試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。