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產(chǎn)品資料

諾如病毒GⅠ型試劑盒熒光PCR法

諾如病毒GⅠ型試劑盒熒光PCR法
  • 如果您對該產(chǎn)品感興趣的話,可以
  • 產(chǎn)品名稱:諾如病毒GⅠ型試劑盒熒光PCR法
  • 產(chǎn)品型號:XG-R63408
  • 產(chǎn)品展商:西格
  • 產(chǎn)品文檔:無相關(guān)文檔
簡單介紹
諾如病毒GⅠ型試劑盒熒光PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品描述

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)

產(chǎn)品名稱

諾如病毒GⅠ型試劑盒熒光PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R63408

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
兔源細(xì)胞DMP質(zhì)量規(guī)格:BRDMP

TNFRSF1B Others Human TNFRSF1B / TNFR2 / CD120b 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 沒食子酸月桂酯(>98.5%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRDodecyl gallate

CL-0175OK(負(fù)鼠腎小管細(xì)胞)5×106cells/瓶×2dUMP;2'-脫氧尿苷-5'-1酸二鈉鹽質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRdUMP, 2'-Deoxyuridine-5'-monophosphate, di salt

NRG1 Others Human NRG1-beta 1 (ECD) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 3-吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRIndoxyl-Glucoside

小鼠腸動脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL2-羥基-5-硝基煙酸(98%)質(zhì)量規(guī)格:0.982-Hydroxy-5-nitronicotinic acid
HCT-8/VCR
細(xì)胞,耐長春新堿結(jié)腸癌細(xì)胞系 人色素瘤細(xì)胞,HME6細(xì)胞 表達(dá)小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細(xì)胞;293KB杯莧甾酮(標(biāo)準(zhǔn)品)Cyasterone質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

H4(人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2四氫小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)Tetrahydroberberine,THB質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

CD274 Others Human PD-L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 通關(guān)藤苷I(標(biāo)準(zhǔn)品)Tenacissoside I質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

人肝臟星形細(xì)胞總RNAHHSteC NA通關(guān)藤苷G(標(biāo)準(zhǔn)品)Tenacissoside G質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品

JAM2 Others Rat 大鼠 JAM-2 / JAM-B 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 白花前胡丙素(標(biāo)準(zhǔn)品)Praeruptorin C質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人支氣管上皮樣細(xì)胞;BEAS-2B 人卵巢上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL乳白蛋白,英文名或英文縮寫:α-Lactalbumin,級別:BR,50u/mg,規(guī)格:1

人神經(jīng)束膜細(xì)胞RNAHPC miRNA5 μg1,1,2-三錄烷 1,1,2-Trichloroqthcnq;Vinyl trichloridq;β-Trichloroqthcnq 79-00-2

ACOX1 Others Human ACOX1 / aox 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 麥芽糖糊精 Mcltodqxtrin 9020-36-6

兔源細(xì)胞甲基本基酮,英文名或英文縮寫:Acetopxenone,級別:色標(biāo),99%,規(guī)格:100

AsPC-1細(xì)胞,轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞 CoC1細(xì)胞耐藥亞株,CoC1/DDP細(xì)胞 人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞;NCI-H232133-40-6L-脯酸鹽酸鹽metxyl L-prolinate xy7nochloride
肺血管平滑肌細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)FISHGELATINBLOCKINGBUFFER,10%魚明膠阻斷試劑蛋白組學(xué)級琥珀色至淺棕色液體COLDsigma

SDC4 Others Mouse 小鼠 Syndecan-4 / SDC4 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) β-葡萄糖苷酶 杏仁 (+4) BqTc-GLUCOSIDcSq 9001--3

人前列腺癌細(xì)胞;PC-3 [PC3]吉姆薩染料 Giemsa stain (for use as a blood stain) 51811-82-6 1G 染色劑

293細(xì)胞,人胚腎細(xì)胞 小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞,A9細(xì)胞 CL-0242Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2甜醇,英文名或英文縮寫:Dulcitol,級別:高,98%,規(guī)格:500毫克

YAC-1(小鼠瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2L-Threonine 25g/100g/250g/500g/1kg 國產(chǎn)
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
諾如病毒GⅠ型試劑盒熒光PCR(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。


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