PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強(qiáng)

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL水合紅菲繞啉二磺酸鈉水合物質(zhì)量規(guī)格：用于亞鐵離子的測定Bathophenanthrolinedisulfonic Acid Di Salt Hydrate

THP1-Blue (穩(wěn)定株)人單核細(xì)胞 THP1-Blue (stable sain) in human monocytes 1640+10% FBS(熱滅活)+200ug/ml Zeocin+0.05mM β-ME浴銅靈 (升華提)(>99.0%(HPLC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(HPLC)(T)Bathocuproine (purified by sublimation)

IL17A Protein Human 重組人 IL17 / IL17A 蛋白莫吉司坦質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRMoguisteine

人脈絡(luò)絲成纖維細(xì)胞 (HCPF)( 5×105 ) HUVEC, 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 Caco-2，人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞莫吉司坦(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Moguisteine

CM-R017大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL糠酸莫米質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP31Mometasone furoate
HuH-6(人肝母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2苯氧乙酸(標(biāo)準(zhǔn)品)Phenoxyacetic acid質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

Promocell C-22010 Endothelial Cell Growth Medium, 內(nèi)皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml菲(標(biāo)準(zhǔn)品)Phenanthrene質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于環(huán)境分析

人骨骼肌細(xì)胞裂解物HSkMCL芘(標(biāo)準(zhǔn)品)Pyrene質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

PRKCD Others Mouse 小鼠 PKC delta / PRKCD 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (-)-鹽酸東莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)(?)-Scopolamine 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.0%

小鼠畸胎瘤細(xì)胞;P19十四烷(標(biāo)準(zhǔn)品)Tetradecane質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)
RH-35細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 人胃腺癌細(xì)胞,AGS細(xì)胞 黃牛皮膚細(xì)胞;BTA-S2苯扎氯銨（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定用Alkyldimethylbenzylammonium chloride

雜交瘤(B類);C3110D2B2甲硫酸新斯的明(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品Neostigmine methyl sulfate

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 甘草酸二鉀（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Dipotassium glycyrrhizinate

臺盼藍(lán)TB尼美舒利（標(biāo)準(zhǔn)品）質(zhì)量規(guī)格：含量測定Nimesulide

MAP2K1 Others Mouse 小鼠 MEK1 / MAP2K1 / MKK1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 苯氧乙酸鈉(>98%,BR)質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRPhenoxyaceti acid  salt
ADIPOQ Others Human 人 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) MEGA-8MEGA-8超級白色固體RTsigma

大鼠滑膜細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL溴柏里酚藍(lán)內(nèi)鹽 BTB 347-90-

RSC96大鼠雪旺細(xì)胞 Schwann cells in RSC96 rats DMEM+10%FBS百里酚藍(lán) Thymol Blue (indicator, Dye content, ... 76-61-9 5G 染色劑

IFNA8 Protein Human 重組人 Ierferon alpha-B / IFNA8 蛋白低范圍RNALadder，英文名或英文縮寫：RiboRuler Low range RNA Ladder，級別：BR，規(guī)格：25克

HuTu-80(人十二脂腸腺癌) 5×106cells/瓶×2 宋內(nèi)氏志賀氏菌(Sh.sonnei)(L-羥脯酸)
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
副溶血弧菌TDH基因試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。