產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號(hào)強(qiáng)
產(chǎn)品名稱(chēng)
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海鷗彎曲菌試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號(hào)
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XG-R63472
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儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專(zhuān)用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過(guò)濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿(mǎn)意,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi),并且要充分混勻。
Tsu-Prl細(xì)胞,非雄依賴(lài)型前列腺癌 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,3T6-Swiss albino細(xì)胞 人前列腺上皮細(xì)胞HPEpiC亞麻酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Methyl linolenate
HS 683(人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2十一酸甲酯(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品Methyl
undecanoate
3T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H059人頸上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL 人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞RNAHIBEpiC miRNA5 μg分子篩, 5 ?(pellets,
2.5-3.5 mm)質(zhì)量規(guī)格:pellets, 2.5-3.5 mmMolecular sieves, 5 ?
CM-R079大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL高嶺土(CP)質(zhì)量規(guī)格:CPKaolin
HA Others H7N9 甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin /
HA) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 超細(xì)高嶺土(325(44um))質(zhì)量規(guī)格:325(44um)Kaolin(superfine)
Kasumi-1細(xì)胞,人急性成髓細(xì)胞白血病 615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株,L7912細(xì)胞 超氧化物歧化酶分析試劑盒SODFmoc-L-瓜氨酸Fmoc-L-Citrulline質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
NCI-H524(人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2DL-丙氨酸DL-Alanine質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
C6(大鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-00063T3-L1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;3T3-Swiss
albinoDL-酪氨酸DL-Tyrosine質(zhì)量規(guī)格:0.98
牛腎細(xì)胞;MDBKDL-甲硫氨酸;蛋氨酸DL-Mine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
IFNGR1 Others Mouse 小鼠 IFNGR1 / CD119 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) DL-天冬氨酸DL-Aspartic acid質(zhì)量規(guī)格:0.98
CCL6 Protein Mouse 重組小鼠 CCL6 / C-C motif
ligand 6 蛋白 (His 標(biāo)簽)司骨化醇質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRSecalciferol
Sf-9(昆蟲(chóng)細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 Ierferon alpha-B
/ IFNA8 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 25-羥甾醇質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR25-Hydroxyvitamin
D2
蚊源細(xì)胞利拉魯肽質(zhì)量規(guī)格:>95%,BRLiraglutide
FUT8 Others Hamster 倉(cāng)鼠 FUT8 (aa 68-575) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) MK4827
(Niraparib)質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRMK-4827 (Niraparib)
原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基Many types of cells包裝:500/250/100醋氯芬酸(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:UV法含量測(cè)定Aceclofenac
WST-1細(xì)胞活力和增殖檢測(cè)試劑盒WST紡錘菌素,英文名或英文縮寫(xiě):Netropsin
dixy7nochloride,級(jí)別:BR,50u/mg,規(guī)格:100克
SERPINA6 Others Mouse 小鼠 SerpinA6 / CBG 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 巴豆全(劇讀) CROTONcLDqHYDq
CHL 中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞UREA尿素超級(jí)白色粉末RTsigma
CL-0054Calu-3(人肺腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2MOLWTMARKER,DNA,HIGHRANGE*DRYICEDNA
Marker生物技術(shù)級(jí)150 gFrozen
大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)(2-脫氧-D-葡萄糖)
檢測(cè)步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
海鷗彎曲菌試劑盒熒光PCR法將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。