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產(chǎn)品資料

艱難梭狀芽孢桿菌試劑盒熒光PCR法

艱難梭狀芽孢桿菌試劑盒熒光PCR法
  • 如果您對該產(chǎn)品感興趣的話,可以
  • 產(chǎn)品名稱:艱難梭狀芽孢桿菌試劑盒熒光PCR法
  • 產(chǎn)品型號:XG-R63493
  • 產(chǎn)品展商:西格
  • 產(chǎn)品文檔:無相關文檔
簡單介紹
艱難梭狀芽孢桿菌試劑盒熒光PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品描述

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

產(chǎn)品名稱

艱難梭狀芽孢桿菌試劑盒熒光PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R63493

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。

檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。

人支氣管平滑肌細胞cDNAHBSMC cDNABOC-L-天冬酰胺質(zhì)量規(guī)格:≥98.5%,BRBoc-Asn-OH

小型豬腎細胞;MPK 畸胎癌細胞,P19細胞 W256細胞,Walker氏癌肉瘤256瘤株Boc-L-谷氨酰胺質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRBoc-Gln-OH

Sars結構蛋白表達株;293 001ABoc-L-丙氨酸 N-丁二酯質(zhì)量規(guī)格:BRBoc-Ala-OSu

HA Others H5N3 甲型流感 H5N3 (A/duck/Hokkaido/167/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) BOC-D-丙氨酸質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRBoc-D-Ala-OH

CL-0240V79(倉鼠肺細胞)5×106cells/瓶×2BOC-L-天冬氨酸質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BRBoc-Asp-OH
LOVE1
細胞,結直腸癌細胞 人色素瘤細胞,B16細胞 EB病毒轉化的人B細胞;HH-29巴馬汀氯化物一水合物(分析標準品)Palmatine chloride hydrate質(zhì)量規(guī)格:分析標準品

HCC827(人非小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2BSA[=N,O-(基硅基)乙酰胺](>75.0%(GC))N,O-Bis(trimethylsilyl)acetamide質(zhì)量規(guī)格:>75.0%(GC)

ARSA Others Human ARSA / Arylsulfatase A 人細胞裂解液 (陽性對照) BSTFA[=N,O-(基硅基)三氟代乙酰胺](>95.0%(GC),用于氣相色譜)

人肝細胞;HL-7702[L-02]N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)

MS4A1 Others Ferret 雪貂 CD20 / MS4A-1 人細胞裂解液 (陽性對照) TMS-咪唑(=N-基硅基咪唑)(>98.0%(T))TMS-Imidazole (=N-Trimethylsilylimidazole)質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)
SW1990
細胞,人胰腺癌細胞 人胸膜瘤細胞,SMC-1細胞 雜交瘤(B);Z51B3C10H12A12G2F7E74-乙酰氧基它莫西芬質(zhì)量規(guī)格:美國進口4-Acetoxy Tamoxifen

HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞) 5×106cells/瓶×2N-去甲基-4-羥基它莫西芬-d5 (1:1 E/Z 混合物)質(zhì)量規(guī)格:美國進口N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen-d5 (1:1 E/Z Mixture)

Promocell C-22022 Endothelial Cell GrowthMedium MV2, 內(nèi)皮細胞生長培養(yǎng)基MV2(即用型) 500ml(Z)-4-羥基-N-去甲基它莫西芬 (同分)質(zhì)量規(guī)格:美國進口(Z)-4-Hydroxy-N-desmethyl Tamoxifen (mixture of isomers)

人**基質(zhì)細胞裂解物HHGMCLN-去甲基-4-羥基它莫西芬 (大約1:1 E/Z 混合物)質(zhì)量規(guī)格:美國進口N-Desmethyl-4-hydroxy Tamoxifen (approx. 1:1 E/Z Mixture)

IL17RB Others Human IL17RB / IL-17 Receptor B 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (1R,4R)-N-去甲基鹽酸舍曲林質(zhì)量規(guī)格:美國進口(1R,4R)-N-Desmethyl Sertraline
肺成纖維細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)DEAE葡聚糖凝膠A-50shēng huà shì jì容量:5KU

MET Others Cynomolgus 食蟹猴 / 恒河猴 c-MET / HGFR 人細胞裂解液 (陽性對照) 亞油酸 Methyl linoleate,99% 112-63-0 1G 通用試劑

艱難梭狀芽孢桿菌試劑盒熒光PCR人成骨肉瘤細胞;MG-63肝速酶I(-20°C) HqPcRINcSq 902-39-

豚鼠心肌細胞;GP-H1 EBV 轉化的絨猴白細胞,B95-8細胞 MEL細胞,小鼠紅白血病細胞PONCEAUS麗春紅S (猩紅S)深紅色結晶粉末RTsigma

人胚肺成纖維細胞;MRC-5587-84-8二本胺化 98%DIpxenYLAMINE SULFATE


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