PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測(cè)個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號(hào)強(qiáng)

儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。

552-66-9大豆苷品牌  Daidzin   豬血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1)試劑盒 Porcine Vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA Kit

552-59-0櫻黃素說明書  Prunetin  豬血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)試劑盒 Pig Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA KIT

552-59-0櫻黃素廠家  Prunetin  豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)試劑盒 Pig Vascular Endothelial-Cadherin Complex,VE-cad ELISA Kit

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol   豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA檢測(cè)試劑盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T

552-58-9圣草酚說明書  Eriodictyol  豬血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(ACE2)試劑盒 Pig Angiotensin conveing enzyme 2,ACE2 ELISA Kit
Rat1,3-βDglucosidase,1,3-βD-GluELISAKit大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βD-Glu)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  54522-52-0甲基原薯蕷皂苷廠家  Methyl protodioscin

載玻片細(xì)胞INSULIN蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20  77-60-1劍麻皂苷元說明書  Tigogenin

Humanγ-glamylsysteinesyhetase,γ-ECSELISA試劑盒人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-ECS)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  458-37-7姜黃素品牌  Curcumin

小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ)ELISA試劑盒 ，英文名： MHC-Ⅲ/H-2Ⅲ ELISA Kit  122-48-5姜酮規(guī)格  Zingerone

小鼠抗酸酸性1酸酶5b(ACP-5b)ELISA檢測(cè)試劑盒Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit 96T/48T  94987-08-3絞股藍(lán)皂苷XLIX廠家  Gypenoside XLIX
犬β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T  104-46-1反式茴香腦品牌  Anethole

犬胸腺肽α1(Thymosin α1)試劑盒 Canine Thymosin α1 ELISA Kit  33889-68-8防己諾林堿規(guī)格  Fangchinoline

英文名稱HumaissuefactorELISAKit人組織因子(TF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  518-34-3粉防己堿廠家  Tetrandrine

超敏型HRP-TMB底物顯色試劑盒10/50  19906-72-0蜂斗菜內(nèi)酯說明書  Bakkenolide

Ratglucocoicoid,GCELISA試劑盒大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)(GC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  484-20-8佛手柑內(nèi)酯品牌  Bergapten；5-Methoxypsoralen
3,6′-二芥子?；崽瞧放?span>  3, 6′-Disinapoyl Sucrose   英文名稱谷氨酸脫羧酶抗體規(guī)格：96T/48T

3,5,6,7,8,3’,4’-七甲氧基黃酮規(guī)格  3,5,6,7,8,3’,4’-heptemthoxyflavone   英文名稱U.S.Salmon.CT.ELISAKit超級(jí)鮭魚(U.S.Salmon.CT.)規(guī)格：96T/48T

29956-99-8氯化天竺葵素廠家  Di-tert-octyl Disulfide    英文名稱TIMP-1金屬蛋白酶組織抑制因子-1規(guī)格：96T/48T

299-39-8硫酸司巴丁廠家  Sparteine sulfate   英文名稱ThromboxaneB2人血栓素(TXB2)規(guī)格：96T/48T

29883-15-6苦杏仁苷說明書  Amygdalin  英文名稱TGF-β1轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子-β1規(guī)格：96T/48T
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
嗜吞噬細(xì)胞無形體試劑盒熒光PCR法三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。