PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

1241-87-81-咖啡?？鼘幩釓S家  Cyclohexanecarboxylicacid   英文名稱RatE-SelectinELISAkit大鼠E選擇素(E-Selectin)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

123748-68-5七葉皂苷A規(guī)格  Escin IA   英文名稱RatEsadiol(E2)ELISAkit大鼠雌二醇(E2)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

123350-57-25補充中2說明書  Hederagenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl (1→2)-α-L-arabinopyranoside   英文名稱RatEsadiol(E2)ELISAkit大鼠雌二醇(E2)ELISAKit規(guī)格：96T/48T

122-48-5姜酮規(guī)格  Zingerone   英文名稱RatERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)規(guī)格：96T/48T

122413-01-8雞屎藤苷酸甲酯廠家  paederosidic acid methyl ester   英文名稱RatERELISAKit大鼠雌二醇受體(ER)規(guī)格：96T/48T
ratai-cardiolipinaibodyIgM,ACA-IgMELISAKit大鼠抗心1脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  19275-46-83-異倒捻子素廠家  3-isomangostin

組蛋白H2B-K16乙酰化檢測試劑盒10/20等  20931-37-7β-倒捻子素說明書  Beta-mangostin

MouseAndrostenedione,ASDELISA試劑盒小鼠雄烯二同(ASD)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  98243-57-3梭砂貝母堿品牌  Hupehenine

小鼠游離狀腺原酸(Free-T3)ELISA試劑盒 ，英文名： Free-T3 ELISA Kit  541-15-1肉堿規(guī)格  L-carnitine

小鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)ELISA檢測試劑盒Mousemyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 96T/48T  39262-14-1人參皂苷CK廠家  Ginsenoside CK
英文名稱MouseIerleukin27ELISAKit小鼠白介素27(IL-27)規(guī)格：96T/48T  24512-62-7山梔子苷B品牌  Gardenoside

冰凍切片總膽舒爾茨染色試劑盒50  131189-57-6山茱萸新苷規(guī)格  Cornuside

RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISA試劑盒大鼠絨毛膜促性腺β(β-CG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T  65497-07-6商陸皂苷甲廠家  esculentosideA

小鼠脂聯(lián)素(Adiponectin,Acrp30)ELISA試劑盒 ，英文名： Adiponectin,Acrp30 ELISA Kit 1802-12-6商陸皂苷元說明書  Phytolaccagenin

牛細(xì)胞因子ELISA檢測試劑盒BovinelymphocytefactorELISAKit 96T/48T  23180-57-6芍藥苷品牌  Paeoniflorin
97-53-0丁香酚規(guī)格  Eugenol   組織堿性1酸酶活性比色法定量檢測試劑盒20

97230-47-2品中文苦玄參苷IA說明書  Picfeltarraenin IA   組織甲基化組蛋白H3-K9染色質(zhì)沉淀分析(CHIP)試劑盒10

970-74-1表沒食子兒茶素廠家  EGC   組織脊髓過氧化酶(MPO)活性高質(zhì)敏感比色法定量檢測試劑盒20

96990-18-0地膚子皂苷Ic品牌  Momordin Ic   組織脊髓過氧化酶(MPO)活性比色法定量檢測試劑盒20

96574-01-5丹酚酸A品牌  Salvianolic acid A   組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-9)捕獲檢測試劑盒20
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
新布尼亞病毒試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。