PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結(jié)果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強
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產(chǎn)品名稱
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軍團菌試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63623
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儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
27200-12-0二氫楊梅素規(guī)格 Dihydromyricetin 英文名稱RatTissuePolypeptideAigenELISAKit大鼠組織多肽抗原(TPA)ELISAKit規(guī)格：96T/48T
27013-91-8α-常春藤皂苷規(guī)格 α-hederin 英文名稱RatTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規(guī)格：96T/48T
26904-64-3氧化槐果堿說明書 Oxysophocarpine 英文名稱RatTissuefactorpathwayinhibitorELISAKit大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)規(guī)格：96T/48T
26833-87-4高三尖杉酯堿廠家 Homoharringtonine 英文名稱Ratthyroopin-releasinghormoneELISAKit大鼠促甲狀腺素釋放(H)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
2680-81-1去氫二異丁香酚品牌 Dehydrodiisoeugenol 英文名稱Ratthyroopin-releasinghormoneELISAKit大鼠促甲狀腺素釋放(H)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
RatImmunoglobulinE,IgEELISA試劑盒大鼠球蛋白E(IgE)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 29702-25-8異牡荊苷廠家 Isovitexin
小鼠長停滯特異性基因產(chǎn)物6(gas-6)ELISA試劑盒 ，英文名： gas-6 ELISA Kit 486-21-5異嗪皮啶說明書 Isofraxidin
小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA檢測試劑盒MouseEndomeiumAibody,EMAbELISAKit
96T/48T 51014-29-0異去氫鉤藤堿品牌 Isocorynoxeine
人巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)試劑盒 Human M-CSF ELISA kit 480-19-3異鼠李素規(guī)格 Isorhamnetin
RatAlternativemacrophageactivation-associatedCCchemokine1,AMAC-1ELISAKit大鼠巨噬細胞替代激活相關(guān)化學因子1(AmAC-1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 55033-90-4異鼠李素-3-O-新橙皮苷廠家 Isorhamnetin-3-O-neohespeidoside
小鼠再生胰島衍生蛋白3γ(REG3γ)ELISA試劑盒 ，英文名： REG3γ ELISA Kit 135247-95-9白頭翁皂苷B說明書 Pulchinenoside B
白介素2受體(IL-2R)ELISA檢測試劑盒MonkeyIerleukin-2receptor,IL-2RELISAkit
96T/48T 14216-03-6常春藤苷C品牌 Hederacoside C
犬抗**/血管加壓素/精氨酸加壓素(AVP)試劑盒 Dog arginine
vasopressin,AVP ELISA kit 366814-42-8苦蘇花皂苷C規(guī)格 Cussosaponin C
英文名稱HumanPAFELISAKit人血小板活化因子(PAF)ELISAKit規(guī)格：96T/48T 128730-82-5常春藤苷H廠家 Kalopanaxsaponin H
化線粒體II型L-3羥?；?span>-CoA
脫氫酶