產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
產(chǎn)品名稱
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百日咳桿菌試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63639
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人脊髓星形膠質(zhì)細胞裂解物HA-sp L草酸鹽芐基肼Benzylhydrazine
oxalate salt質(zhì)量規(guī)格:美國進口
CD55 Others Rat 大鼠 CD55 / DAF 人細胞裂解液 (陽性對照) N-去甲酰-N-芐氧羰基奧利司他N-Deformyl-N-benzyloxycarbonyl
Orlistat質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人小腦顆粒細胞完全培養(yǎng)基 100mL(2S,3R,5S)-5-[(N-甲酰-L-亮氨酰)氧]-2-己基-3-羥基十六烷酸(奧利司他雜質(zhì))(2S,3R,5S)-5-[(N-Formyl-L-leucyl)oxy]-2-hexyl-3-hydroxyhexadecanoic
Acid (Orlistat Impurity)質(zhì)量規(guī)格:美國進口
NRK細胞,大鼠腎小管上皮細胞 PT-67(病毒轉(zhuǎn)染小鼠細胞) 豬腎細胞;PK(15)C17鞘氨醇C17 Sphingosine質(zhì)量規(guī)格:美國進口
EFNA3 Protein Human 重組人 Ephrin-A3 / EFNA3 蛋白 (His 標(biāo)簽)D-赤-鞘氨醇 C-15D-erythro-Sphingosine C-15質(zhì)量規(guī)格:美國進口
REG3B Others Mouse 小鼠 REG3B / Pap1 人細胞裂解液 (陽性對照) MG132,蛋白酶體抑制劑MG-132質(zhì)量規(guī)格:>98%,proteasome抑制劑
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS4B;Vero-HCV-NS4BPD184352 (CI-1040)PD-184352
(CI-1040)質(zhì)量規(guī)格:>99%,MEK1/2抑制劑
NCI-H520細胞,人肺鱗癌細胞 小鼠間質(zhì)細胞瘤細胞,MLTC-1細胞 CM-R023大鼠管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基100mL2-脫氧-D-葡萄糖2-Deoxy-D-glucose質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
QGY-7701(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2坎地沙坦Candesartan質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細胞培養(yǎng)
Promocell C-28040 Pericyte Growth Medium, 周細胞生長培養(yǎng)基 500mlRuxolitinib(INCB018424) phosphateINCB018424) phosphate質(zhì)量規(guī)格:>98%,JAK1/2抑制劑
NCI-H209(人小細胞肺癌細胞) 5×106cells/瓶×2Hematinchloride血晶素25克IND
BNL CL.2(小鼠胚胎肝細胞) 5×106cells/瓶×2 CM-M046小鼠腸上皮細胞完全培養(yǎng)基100mL 人多發(fā)性骨髓瘤細胞;RPMI-8226
[RPMI8826]草酸酰胺乙酯 Ethyl oxamate,98% 617-36-7 25G 通用試劑
獼猴皮膚細胞;MMS4熒光速;熒光橙 Fluorqscqin;Dixy7noxyfluorcnq;Tqtrcoxyphthclophqnonqcn hydridq;C.I. 45350 1931-7-2
CD5 Others Rat 大鼠 CD5 人細胞裂解液 (陽性對照) (T-4)-雙(D-葡萄糖酸-κO1,κO2)-鋅,英文名或英文縮寫:Zinc gluconate,級別:BR,98%,規(guī)格:5U
人肺微血管內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL硅酮 OV-225SILICONE OV-225
非洲綠猴腎細胞(SV40轉(zhuǎn)化);COS-1 [COS1]鹽酸鳥糞素,英文名或英文縮寫:Guanine HC1,級別:BR,935ug/mg,規(guī)格:100KU
GZMH Others Human 人 Granzyme H 人細胞裂解液 (陽性對照) 言醋西替利嗪 Cqtirizinq
xy7nochloridq 83881-2-1
大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(高分化);PC-12(高分化)RNASEA,PANCREATIC核糖核酸酶A白色至淺棕色粉末FROZENsigma
人腦微血管內(nèi)皮細胞 (HBMEC) ( 5×105 )STREPTAVIDIN鏈霉親合素生物技術(shù)級5MG9013-20-1Frozen
肺血管平滑肌細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)4-metxylumbelliferone
5g/10g/25g/100g原裝 Sigma M1381
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
百日咳桿菌試劑盒熒光PCR法薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。