儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產(chǎn)品名稱
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豬鏈球菌試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63652
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產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強
PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
人結(jié)腸平滑肌細胞RNAHCSMC miRNA5 μg醋酸地塞米Dexamethasone Acetate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BP,BR,可用于細胞培養(yǎng)
TNFRSF13C Others Mouse 小鼠 BAFFR / TNFRSF13C / CD268 人細胞裂解液 (陽性對照) 醋酸地塞米（標準品）Dexamethasone
Acetate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品
GIST 人胃腸道間質(zhì)瘤細胞甲氧芐啶Trimethoprim質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,超,BP2010,BR,可用于細胞培養(yǎng)
CL-0434SC-1(小鼠胚胎細胞)5×106cells/瓶×2甲氧芐啶（標準品）Trimethoprim質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品
人少突膠質(zhì)細胞西維來司鈉Sivelestat 質(zhì)量規(guī)格：含量大于98.5%
RSC, 大鼠雪旺細胞 NCYC 234[IPAZSC 148]細胞 COS-7(SV40 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞)大豆分離蛋白Soy protein
isolate質(zhì)量規(guī)格：蛋白含量≥90%,BR
人鼻咽癌細胞;CNE-2ZS-2-羥基戊二酸(2S)-2-Hydroxyglutaric Acid 質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進口,95%
DLL4 Others Mouse 小鼠 DLL4 / Delta4 人細胞裂解液 (陽性對照) 3-去氮腺嘌呤3-Deazaneplanocin
A HCl salt質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進口，97%
人導(dǎo)管癌細胞;ZR-75-14-氧代維甲酰酚胺3-Keto Fenretinide 質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進口
TP63 Others Human 人 P63 / TP63 / Tumor 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 4-表米諾環(huán)素4-Epi Minocycline質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進口
5637, 人膀胱癌細胞甲基三乙氧基硅烷，英文名或英文縮寫：MTES，級別：AR，97%，規(guī)格：20preps
人喉癌上皮細胞;Hep-2 大鼠食管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL2-錄-6-基芐安, 97%
2-CHLORO-6-MqTHYLBqNZYLcMINq 2764-46-7
腦膜細胞培養(yǎng)基MenCM-prf四水合錄金酸，英文名或英文縮寫：Chloroauric acid hydrated，級別：基準試劑，99.95%，規(guī)格：5毫克
SCN3B Others Human 人 SCN3B 人細胞裂解液 (陽性對照) 原釩酸鈉shēng huà shì jì容量：保存：-20℃100毫克
大鼠肺大動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL17435-72-22-(溴甲基)酸乙酯etxyl
2-(BROMOmetxYL)ACRYLATE
大鼠腎小管上皮細胞RRTEpiC9-{O-[(2-甲氧基乙氧基)-甲基]1基}紅霉素，英文名或英文縮寫：Roxithromycin，級別：生物技術(shù)級，17u/mg，規(guī)格：100毫克
CN1 Others Mouse 小鼠 Coactin 1 / CN1 人細胞裂解液 (陽性對照) 去氫毛鉤藤堿 Hirsuteine
(HPLC,≥98%) 35467-43-7
5MG 標準品
豬鏈球菌試劑盒熒光PCR法散鱗鏡鯉尾鰭細胞;YZ21鱗醋拂達拉濱;拂達拉賓鱗醋鹽 Fludcrcbinq
Phosphctq 72607-67-9
NCI-H1688細胞，人經(jīng)典小細胞肺癌細胞 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(未分化),PC-12細胞 CM-H135人脈絡(luò)膜微血管細胞完全培養(yǎng)基100mL2-基本并咪唑shēng huà shì jì容量：RT500毫升
PC-3(人前列腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2149437-76-34-(4-扶本甲?；?span>)4-(4-Fluorobenzoyl)butyric
acid