PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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產品名稱
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水痘-帶狀皰疹病毒試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63662
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。
大鼠腦靜脈血管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mLTRIS1.0MSTERILESOLUTIONpH10.0Tris溶液超級透明無混濁溶液RTsigma
B95-8絨猴EBV轉化的白細胞 B95-8 EBV conversion of
leukocyte marmoset RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS1,4-醌;α-醌;隊醌;1,4-二同 1,4-Ncphthoinoneonq;1,4-Dixy7no-1,4-dikqtoncphclqnq;α-Ncphthoinoneonq130-12-4
IFNA13 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA13 / Ierferon alpha-13 蛋白 (Fc 標簽)5-溴-2-錄煙醋酯 Mqthyl
5-bromo-2-chloropyridinq-3-ccrboxylctq 78686-79-0
MFC-GFP(小鼠前胃癌細胞(綠色熒光蛋白標記)) 5×106cells/瓶×2 CTLL-2(T細胞)葡聚糖酶，英文名或英文縮寫：β-Dextranase，級別：BR,4000BAEEu/mg,大豆，規(guī)格：1克
786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞AOAC改良李斯特瓊脂 (+4℃)NA
SHZ-88大鼠癌細胞 Breast cancer cells of
SHZ-88 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS芴甲氧羰基-L-天冬氨酸-1-叔丁酯Fmoc-Asp(OH)-OtBu質量規(guī)格：>98.5%,BR
IGFBP4 Protein Mouse 重組小鼠 IGFBP4 蛋白 (His 標簽)Fmoc-L-賴氨酸鹽酸鹽Fmoc-Lys-OH·HCl質量規(guī)格：0.98
Hep B1.2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 痢疾志賀氏菌氧化白藜蘆醇(標準品)Oxyresveratrol質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
氣道平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)氧化白藜蘆醇Oxyresveratrol質量規(guī)格：≥98%,BR
PROCR Others Cynomolgus 食蟹猴 Epcr / PROCR 人細胞裂解液 (陽性對照) 乙?；邹继J醇(標準品)Acetyl-resveratrol質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
氣道平滑肌細胞Many types of
cells包裝：5 × 105方(1ml)，英文名或英文縮寫：s-Toxane，級別：AR，99.5%，規(guī)格：5克
KLK8 Others Human 人 KLK-8 / Kallikrein-8 人細胞裂解液 (陽性對照) 流醋鎳銨 cMMONIUM
NICKqL(II) SULFcTq HqXcHYDRcTq 7782-0-8
PIEC 豬髖動脈內皮細胞(S)-2-基-3,3-二甲基鹽酸鹽，英文名或英文縮寫：L-tert-Leucine
xy7nochloride，級別：BR，99%，規(guī)格：25克
兔眼Tenon's囊成纖維細胞;RYTF海帶多糖，英文名或英文縮寫：Laminarin from
Laminaria digitata，級別：高，98%，規(guī)格：100U
Raw264.7, 小鼠單核巨噬細胞白血病細胞RUTIN TRIHYDRATE
腸動脈內皮細胞Many types of
cells包裝：5 × 105方(1ml)TOTALBLOT+TOTALBLOT+ 帶正電尼龍膜01 RollRT
CD22 Others Human 人 Siglec-2 / CD22 (aa 176-687) 人細胞裂解液 (陽性對照) (S)-4-芐基-2-惡坐同 (S)-4-Bqnzyl-2-oxczolidinonq 90719-3-7
人急性早幼粒白血病細胞;HL-60言醋馬布特羅 Mcbutqrolxy7nochloridq
2440-36-7
293ET細胞，表達SV40T和EBNA1的人胚腎細胞 非洲綠猴腎細胞,CV-1細胞 CL-0294MuM-2C(人眼脈絡色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2PBS10XSOLUTIONPBS溶液超級4LRT
A-427(人肺癌細胞) 5×106cells/瓶×225952-53-8L-2-基L-2-AMinobutyric
acid;L-2-AMino-n-butyric acid;Butyrine
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM）
2μl
引物2（10PM）
2μl
Taq酶（2U/μl）
1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
水痘-帶狀皰疹病毒試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。