PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

中國倉鼠卵巢細胞-二氫葉酸還原酶缺陷型;CHO/dhFr- 喉表皮樣癌細胞，HEp-2細胞 SF-9細胞，昆蟲細胞系胰高血糖素樣肽-2（1-34)，人質量規(guī)格：>95%,BRGLP-2 (1-34) (human)

人胚肺成纖維細胞;CCC-HPF-1胰高血糖素（1-29），牛，人，豬質量規(guī)格：>95%,BRGlucagon (1 - 29), bovine,human, porcine

單純皰疹病毒試劑盒熒光PCR法HA Others H3N2 甲型流感 H3N2 (A/Wisconsin/67/X-161/2005) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 胰高血糖素（19-29），牛，人，豬質量規(guī)格：>95%,BRGlucagon (19 - 29), bovine,human, porcine

支氣管成纖維細胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)胰高血糖素樣肽Ⅰ（7-36）酰胺，人質量規(guī)格：>95%,BRGlucagon-Like Peptide I (7-36),amide, human

ASGR2 Others Human 人 ASGR2 人細胞裂解液 (陽性對照) 升麻素（標準品）質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品Cimifugin
倉鼠腎細胞;HL-1地拉羅司,去鐵斯若Deferasirox質量規(guī)格：>99.0%

小鼠樹突狀細胞肉瘤低轉移細胞(綠色熒光蛋白標記);DG6-GFP 小鼠內臟脂肪細胞完全培養(yǎng)基 100mL地拉羅司(標準品)Deferasirox質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品

HET-1A, 人食管上皮細胞 Human利培酮Risperidone質量規(guī)格：>98%,BR,可用于細胞培養(yǎng)

CD209B Others Mouse 小鼠 CD209B / DC-SIGNR1 人細胞裂解液 (陽性對照) 利培酮（標準品）Risperidone質量規(guī)格：HPLC>99%,標準品

人顱骨造骨細胞裂解物HCOL利托那韋(標準品)Ritonavir質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品
人胚肺二倍體細胞;KMB-17 人甲狀腺濾泡上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL聚酰胺shēng huà shì jì容量：10毫升

人卵巢腺癌細胞;SK-OV-32,4,5-三錄本酚 2,4,5-Trichlorophqnol 92-92-4

APCS Others Human 人 Serum amyloid P compone / APCS / SAP 人細胞裂解液 (陽性對照) 微量可調移液器P10shēng huà shì jì容量：保存：-20℃1克

兔脂肪間質干細胞 Rabbit adipose derived mesenchymal stem cells虎紅鈉鹽shēng huà shì jì容量：100克

BE(2)-M17細胞，人神經母細胞瘤細胞 寄生曲霉 293來源病毒包裝細胞;ΦA117-78-22-羧基醌ANTHRAinoneONE-2-CARBOXYLIC ACID
人急性T細胞白血病細胞;Jurkat, Clone E6-1 大鼠肝動脈內皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL溴化亞銅shēng huà shì jì容量：100克

角質細胞生長添加物KGS番石榴二醛 Guajadial 959860-49-2 5MG 通用試劑

CA9 Others Canine 狗 Carbonic Anhydrase IX / CA9 人細胞裂解液 (陽性對照) L-派啶-2-羧醋 L(-)-Pipqcolinic ccid 3102-92-1

大鼠氣管上皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL間甲基紅shēng huà shì jì容量：100克

CRFK細胞，貓腎細胞 SK-HEP-1(人肝癌細胞) 獼猴肺細胞;MML284-77-5鄰本二二癸酯;本二二正癸酯;鄰酞酸二正癸酯Didecyl phthalate;Di-n-decyl-o-phthalate;Convoil-20;DDP