產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
產(chǎn)品名稱
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人類皰疹病毒7型試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63740
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
62956-48-3戈米辛G規(guī)格 Gomisin G 轉(zhuǎn)基因玉米MON810品系試劑盒20
62596-29-6桑辛素廠家 Morusin 轉(zhuǎn)基因玉米MON802品系試劑盒20
62499-28-9巴利森苷B說明書 Parishin B 轉(zhuǎn)基因玉米CBH351(starlink)品系試劑盒20
62499-28-9巴利森苷A品牌 Coniferin 轉(zhuǎn)基因玉米Bt-Xa品系試劑盒20
62499-27-8天麻素品牌 Gastrodin 轉(zhuǎn)基因玉米Bt176(maximizer)品系試劑盒20
超強HRP酶聯(lián)檢測封閉溶液10毫升 1405-86-3甘草酸說明書 Glycyrrhizic acid
RatGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide,GIPELISA試劑盒大鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 23720-80-1甘松新酮品牌 Nardosinone
小鼠轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(T)ELISA試劑盒 ,英文名: T ELISA Kit 32619-42-4橄欖苦苷規(guī)格 Oleuropein
犬(T)ELISA檢測試劑盒CanineTestoterone,TELISAKit
96T/48T 17680-84-1高車前苷廠家 Homoplantaginin
犬心型脂肪酸結(jié)合蛋白(h-FABP)試劑盒 Canine hea fatty acid
binding protein,h-FABP ELISA Kit
1447-88-7高車前素說明書 Hispidulin
超氧化物歧化酶(SOD)標準曲線測定試劑盒5 467-55-0海柯皂苷元規(guī)格 Hecogenin
RatGlycogenphosphorylaseMM,GP-MMELISA試劑盒大鼠糖原1酸化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 80681-44-3亥茅酚苷廠家 Sec-O-Glucosylhamaudol
小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅱ(TGFβR2)ELISA試劑盒 ,英文名: TGFβR2 ELISA Kit 51059-44-0漢黃芩苷說明書 Wogonoside
犬胰島素受體β(ISR-β)ELISA檢測試劑盒CanineInsulieceptorβ,ISR-βELISAKIT
96T/48T 4431-01-0蒿本內(nèi)酯品牌 Ligustilide
犬細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)試劑盒 Dog iercellular adhesion
molecule 1,ICAM-1/CD54 ELISA Kit
475-83-2荷葉堿規(guī)格 Nuciferine
22427-39-0人參皂苷Rg1品牌 Ginsenoside Rg1 英文名稱RatPSAELISAKit大鼠前列腺特異性抗原(PSA)規(guī)格:96T/48T
22368-21-4異澤蘭黃素說明書 Eupatilin 英文名稱RatPSAELISAKit大鼠前列腺特異性抗原(PSA)規(guī)格:96T/48T
22368-21-4異澤蘭黃素廠家 Eupatilin 英文名稱RatproteinkinaseBELISAKit大鼠蛋白激酶B(PKB)規(guī)格:96T/48T
22338-71-2遠志酸廠家 Polygalacic acid 英文名稱RatproteinkinaseBELISAKit大鼠蛋白激酶B(PKB)規(guī)格:96T/48T
22255-40-9馬錢苷酸廠家 Loganic acid 英文名稱RatProlactinELISAKit大鼠促乳素(Prolactin)規(guī)格:96T/48T
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
人類皰疹病毒7型試劑盒熒光PCR法7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。