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產(chǎn)品資料

人ACTB基因試劑盒熒光PCR法

人ACTB基因試劑盒熒光PCR法
  • 如果您對該產(chǎn)品感興趣的話,可以
  • 產(chǎn)品名稱:人ACTB基因試劑盒熒光PCR法
  • 產(chǎn)品型號: XG-R63783
  • 產(chǎn)品展商:西格
  • 產(chǎn)品文檔:無相關文檔
簡單介紹
人ACTB基因試劑盒熒光PCR法保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品描述

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復孔間差異小,實驗結(jié)果重復性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強

產(chǎn)品名稱

ACTB基因試劑盒熒光PCR

規(guī)格

50T

貨號

XG-R63783

儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix (2mM)             
4 μl     引物1(10pM)                 
2 μl     引物2(10pM)                 
2 μl     Taq酶 (2U/μl)               
1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(EGFP標記) Mouse牛磺膽酸鈉(標準品)質(zhì)量規(guī)格:TLC97%,標準品Taurocholic acid  Salt

CD300C Others Human CD300C / CMRF-35 / IGSF16 人細胞裂解液 (陽性對照) 牛磺膽酸鈉質(zhì)量規(guī)格:>97%,BRTaurocholic acid  Salt

雜交瘤(B);Z172A4C4C6F3G12諾米林(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品Nomilin

KIRREL3 Others Rat 大鼠 KIRREL3 / NEPH2 人細胞裂解液 (陽性對照) 歐當歸內(nèi)酯A(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品Levistilide A

腸靜脈內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105(1ml)人參皂苷Rh3(標準品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC98%,標準品Ginsenoside Rh3
大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs) Rattus鉍粒(>99%,BR)Bismuth, granular質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR

EFNA3 Others Mouse 小鼠 EFNA3 / Ephrin-A3 人細胞裂解液 (陽性對照) β-萘氧乙酸鈉(植物級)BNOA-Na, β--Naphthoxyacetic acid  salt質(zhì)量規(guī)格:>98%,植物級

人海馬趾星形膠質(zhì)細胞cDNAHA-h cDNABrij 56Brij 56質(zhì)量規(guī)格:BR

CSF2 Others Mouse 小鼠 GM-CSF / CSF2 人細胞裂解液 (陽性對照) 溴藍鈉鹽Bromochlorophenol blue  salt質(zhì)量規(guī)格:Ind Grade

小鼠色素瘤細胞;B16-F1溴酚藍鈉鹽Bromophenol blue,  salt質(zhì)量規(guī)格:BS Grade
人口腔表皮樣癌細胞;KBL-shēng huà shì jì容量:25

AMY2A Others Human AMY2A / Alpha-amylase 人細胞裂解液 (陽性對照) 5-溴尿苷 5-Bromouridine,98% 957-75-5 250MG 通用試劑

人肝動脈內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL六本 HqxcMqthylbqnzqnq;Mqllithqnq 87-82-4

NFS-60細胞,小鼠白血病細胞G-CSF依賴性 HeLa [ Chang Liver ](張氏肝細胞) 非洲綠猴腎細胞;BS-C-1HEPESwo7iumSALTHEPES, Na**白色粉末RTsigma

XCL2 Protein Human 重組人 XCL2 蛋白 (His 標簽)6285-5-84`-錄本4'-Chloropropiopxenone
DUSP3 Others Human
DUSP3 / VHR 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) TRISTris蛋白組學級白色結(jié)晶粉末RTsigma

人胚腎細胞;293 [HEK-293]1,3-二錄炳醇 1,3-Dichloro-2-propcnol1996/3/1

Mv.1.Lu細胞,貂肺上皮細胞 人結(jié)腸癌細胞,CW-2細胞 CM-H093人顱蓋造骨細胞完全培養(yǎng)基100mL紅色流化工 MqRCURY(II) SULFIDq 1344-48-2

大鼠腎系膜細胞;RMC糖原九型,英文名或英文縮寫:Glycogen from bovine liver,級別:超,99%,規(guī)格:100毫克

HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Brevig Mission/1/1918) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) 56-82-6DL-甘油醛 ≥90% (GC)DL-GLYCERALDEHYDE
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
ACTB基因試劑盒熒光PCR推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。


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