PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產品特點: 本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數的基因
特異性高：有效避免非特異性擴增的出現
穩(wěn)定性高：復孔間差異小，實驗結果重復性強
擴增性能優(yōu)：擴增效率高，熒光信號強

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內**的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

犬前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒 Canine prostate specific aigen,PSA ELISA Kit 3',3'',5',5''-四酚酞乙酯(80%,用于顯微鏡)  3',3'',5',5''-Tetrabromophenolphthaleinethyl ester  質量規(guī)格：80%,用于顯微鏡

犬熱休克蛋白60,線粒體(HSPD1/Hsp-60)試劑盒 Dog 60 kDa heat shock protein,mitochondrial,HSPD1 ELISA kit 二甲基亞砜(AR,>99%(GC))   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：AR,>99%(GC)

犬熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 Canine Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit 二甲基亞砜(>99.8%(GC))   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：>99.8%(GC)

犬熱休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)試劑盒 Dog heat shock 70 kDa protein 1A,HSPA1A ELISA kit 二甲基亞砜(分子生物學,≥99.9%)   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：分子生物學,≥99.9%

犬軟骨寡聚基質蛋白(COMP)試劑盒 Dog cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA kit 二甲基亞砜(多肽合成)   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：多肽合成

犬狀腺原氨酸(T3)ELISA檢測試劑盒Caninei-iodothyronine,T3 96T/48T 二甲基亞砜(藥用級)   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：藥用級

犬狀腺原氨酸(T3)試劑盒 Canine i-iodothyronine,T3 ELISA Kit 2,2′-雙雙苯(98.0%)  2,2′-Dibromobiphenyl  質量規(guī)格：0.98

犬神經型合成酶(nNOS)試劑盒 Canine Neuronal Niic Oxide Syhase,nNOS ELISA Kit 2,4,5,6-四氨基嘧啶硫酸鹽(≥98.0%)  2,4,5,6-Tetraaminopyrimidine sulfate salt  質量規(guī)格：≥98.0%

犬腎上腺髓質素(ADM)ELISA檢測試劑盒Canineadrenomedullin,ADM 96T/48T 煙酸甲酯(99%)  Methyl nicotinate  質量規(guī)格：0.99

犬腎上腺髓質素(ADM)試劑盒 Dog adrenomedullin,ADM ELISA Kit N-甲基-N-(基硅基)乙酰胺(97%)  N-Methyl-N-(trimethylsilyl)acetamide  質量規(guī)格：0.97
二甲基亞砜(AR,>99%(GC))   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：AR,>99%(GC) 犬熱休克蛋白60,線粒體(HSPD1/Hsp-60)試劑盒 Dog 60 kDa heat shock protein,mitochondrial,HSPD1 ELISA kit

二甲基亞砜(>99.8%(GC))   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：>99.8%(GC) 犬熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 Canine Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit

二甲基亞砜(分子生物學,≥99.9%)   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：分子生物學,≥99.9% 犬熱休克蛋白70kDa蛋白1A(HSPA1A)試劑盒 Dog heat shock 70 kDa protein 1A,HSPA1A ELISA kit

二甲基亞砜(多肽合成)   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：多肽合成 犬軟骨寡聚基質蛋白(COMP)試劑盒 Dog cailage oligomeric maix protein,COMP ELISA kit

二甲基亞砜(藥用級)   Dimethyl sulfoxide  質量規(guī)格：藥用級 犬狀腺原氨酸(T3)ELISA檢測試劑盒Caninei-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T

2,2′-雙雙苯(98.0%)  2,2′-Dibromobiphenyl  質量規(guī)格：0.98 犬狀腺原氨酸(T3)試劑盒 Canine i-iodothyronine,T3 ELISA Kit

2,4,5,6-四氨基嘧啶硫酸鹽(≥98.0%)  2,4,5,6-Tetraaminopyrimidine sulfate salt  質量規(guī)格：≥98.0% 犬神經型合成酶(nNOS)試劑盒 Canine Neuronal Niic Oxide Syhase,nNOS ELISA Kit

煙酸甲酯(99%)  Methyl nicotinate  質量規(guī)格：0.99 犬腎上腺髓質素(ADM)ELISA檢測試劑盒Canineadrenomedullin,ADMELISAKit 96T/48T

N-甲基-N-(基硅基)乙酰胺(97%)  N-Methyl-N-(trimethylsilyl)acetamide  質量規(guī)格：0.97 犬腎上腺髓質素(ADM)試劑盒 Dog adrenomedullin,ADM ELISA Kit

苔黑酚一水合物(98%)  Orcinol monohydrate  質量規(guī)格：0.98 犬腎素(Renin)ELISA檢測試劑盒CanineReninELISAKit 96T/48T
小鼠堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 鋅試劑  Zincon  質量規(guī)格：AR

Rat soluble Toll like receptor 2 (sTLR2) ELISA Kit 大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)ELISA試劑盒 鉛試劑  Dithizone  質量規(guī)格：AR

Humanplasmin/fibrinolysin,PL/FbnELISAKit 人纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝 鎂試劑I  MagnesonI  質量規(guī)格：AR

Humanai-epidemichemorrhagicfevervirusIgMaibody,EHFIgMELISA試劑盒人抗流行性出血熱病毒抗體IgM(EHF)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 鎂試劑II  MagnesonII  質量規(guī)格：AR

人抗白色(C.albicans)IgE抗體 試劑盒 Human Candida Albicans(C.albicans)IgE aibody ELISA Kit 二氫辣椒素酯 HPLC≥98% 10mg

人抗斑疹傷寒抗體(ai-typhus-Ab)試劑盒 Human ai-typhus aibody ELISA Kit 二氫辣椒堿（標準品）  Dihydrocapsaicin  質量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人抗表皮細胞基底膜抗體(EBMZ)試劑盒 Human epidermal baseme membrane zone,EBMZ ELISA Kit 二氫辣椒堿 HPLC≥98% 20mg

人抗補體1q抗體(ai-C1q-aibody)試劑盒 Human ai-C1q-aibody ELISA Kit 二氫柯楠因 HPLC≥95% 20mg

人抗促甲狀腺素受體抗體(Ab)試劑盒 human thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit 二氫姜黃素 HPLC≥98% 20mg

人抗促卵泡素抗體(Ai FSH Ab)試劑盒 Human Ai FSH Ab ELISA Kit 二氫黃連堿 HPLC≥98% 20mg

人抗單核細胞抗體(AMA)試劑盒 Human ai-Monocyte aibody,AMA ELISA Kit 二氫葫蘆素B HPLC≥95% 20mg
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
牛種特異性基因試劑盒熒光PCR法三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
４．PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應在冰浴上化開，并且要充分混勻。