產(chǎn)品特點(diǎn): 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個(gè)位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu):擴(kuò)增效率高,熒光信號強(qiáng)
產(chǎn)品名稱
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貉種特異性基因試劑盒熒光PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63804
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儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個(gè)專用的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。
人β-微精原蛋白(MSMB/PRSP)試劑盒 Human MSMB/PRSP
ELISA kit O-(2,3,4,5,6-五氟芐基)羥胺鹽酸鹽(>98.0%(HPLC)(N))
O-(2,3,4,5,6-Pentafluorobenzyl)hydroxylamine 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(N)
人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)試劑盒 Human β-site
APP-Cleaving Enzyme 1,BACE1 ELISA kit 壬烷(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物) Nonane 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)試劑盒 Human beta-site
APP-cleaving enzyme 2,BACE2 ELISA Kit 二十烷(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物) Eicosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人β細(xì)胞素(BTC)試劑盒 Human beta cellulin,BTC
ELISA Kit 二十一烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Heneicosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)試劑盒 Human β-Thromboglobulin,β-TG ELISA Kit 二十二烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Docosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人β抑制蛋白2(ARRB2)試劑盒 human ARRB2 ELISA Kit 二十三烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Tricosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白(BC)試劑盒 Human BC ELISA Kit 二十四烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Tetracosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
人γ氨基(GABA)ELISA檢測試劑盒HumanGamma-aminobyricacid,GABA
96T/48T 二十五烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物二十四烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Tetracosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人β-轉(zhuǎn)導(dǎo)素重復(fù)序列包含蛋白(BC)試劑盒 Human BC ELISA
Kit
二十五烷(>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Pentacosane 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ氨基(GABA)ELISA檢測試劑盒HumanGamma-aminobyricacid,GABAELISAKit
96T/48T
正辛酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl n-Octanoate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ氨基(GABA)試劑盒 Human
Gamma-aminobyric acid,GABA ELISA Kit
壬酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Nonanoate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ分泌酶試劑盒 Human γ-Secretase ELISA
kit
甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Laurate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ分泌素激活蛋白(PION)試劑盒 Human PION ELISA
Kit
肉豆蔻酸甲酯(>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)) Methyl Myristate 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%(GC),標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) 人γ干擾素(IFN-γ)抗體試劑盒 Human IFN-γ aibody ELISA kit
HSV2(HERPESSIMPLX2)病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒2 BOC-L-酪氨酸甲酯 Boc-Tyr-OMe 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
Mouseβmannosidase,βManaseELISA試劑盒小鼠β甘露糖苷酶(βManase)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T N-叔丁氧羰基-O-(2-芐氧羰基)-L-酪氨酸 Boc-O-(2-bromo-Cbz)-L-Tyrosine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
小鼠膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒 ,英文名: Collagenase I ELISA Kit
Boc-O-叔丁基-L-酪氨酸 Boc-O-tert-butyl-L-tyrosine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
大鼠細(xì)胞周期素D3(Cyclin-D3)ELISA檢測試劑盒RatCyclin-D3ELISAKit 96T/48T
BOC-D-纈氨酸 Boc-D-Val-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人促甲狀腺素(TSH)試劑盒 Human Thyroid Stimulating
Hormone,TSH ELISA Kit BOC-L-苯甘氨酸 Boc-Phg-OH 質(zhì)量規(guī)格:0.98
RatSolubleIercellularAdhesionMolecule1,sICAM-1ELISAKit大鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子1(sICAM-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T BOC-L-高苯丙氨酸 BOC-L-Homophenylalanine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
HSV病毒DNA化試劑盒20 BOC-D-絲氨酸甲酯 BOC-D-Serine methyl ester 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Mouseβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISA試劑盒小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T BOC 精氨酸 Boc-Arg(Pbf)-OH 質(zhì)量規(guī)格:0.98
小鼠膠原酶Ⅲ(Collagenase Ⅲ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝 Fmoc-L-丙氨酸 Fmoc-Ala-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
Rat granzyme A (Gzms-A) ELISA Kit 大鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒 Fmoc-L-苯丙氨酸 Fmoc-Phe-OH 質(zhì)量規(guī)格:0.98
TSPAN1 Others Human 人 TSPAN1 (aa
110-211) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 茜素25克
腦靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)4-基苯硼酸 4-Vinylphenylboronic acid 2156-4-9 1G 通用試劑
H-4-II-E細(xì)胞,大鼠肝細(xì)胞瘤 人卵巢癌細(xì)胞,Caov-3細(xì)胞 人髓核細(xì)??裂解物HNPCLL-刀豆安醋(2-8°C)
L-cLPHc-cMINO-GcMMc-[GUcNIDINOOXY]-N-BUTYRIC cCID 243-38-4
非洲綠猴腎細(xì)胞;VERO E6葡聚糖凝膠S-200HR250U
IFNB1 Others Human 人 Ierferon beta / IFN-beta / IFNB 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 銨Ammonium, Quant
Test Strips
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個(gè)測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計(jì)算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1貉種特異性基因試劑盒熒光PCR法循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。