PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷
靈敏度高:可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高:復(fù)孔間差異小,實驗結(jié)果重復(fù)性強
擴增性能優(yōu):擴增效率高,熒光信號強
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)**的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱
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雞滑液囊支原體(MS)試劑盒熒光-PCR法
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規(guī)格
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50T
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貨號
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XG-R63818
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檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
牛血小板**素(TPO)試劑盒 Bovine Thrombopoietin,TPO
ELISA kit 分散橙37(標準品) Disperse Orange
37 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛亞硫酸鹽氧化酶(sulfite oxidase,SO)試劑盒 Bovine Sulfite
Oxidase(sulfite oxidase,SO)ELISA Kit 二乙基錫(標準品) Diethyltin-dichloride 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,10ng/μl溶于環(huán)己烷
牛氧化酶(aldehyde oxidases,AO)試劑盒 Bovine aldehyde oxidase
I(aldehyde oxidases,AO)ELISA Kit 草萘胺(標準品) Napropamid 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛氧雜蒽氧化酶試劑盒 Bovine xahene oxidase ELISA Kit 除蟲脲標準溶液(10μg/ml,u=3%) Diflubenzuron solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=3%
牛葉酸(FA)試劑盒 Bovine folic acid,FA ELISA Kit 二噻農(nóng)(標準品) Dithianon 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛胰島素(Insulin)試劑盒 Bovine Insulin ELISA kit 棉隆(標準品) Dazomet 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,97%
牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA檢測試劑盒BovineInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1
96T/48T 雙(標準品) Dichlorophene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)試劑盒 Bovine Insulin-like growth
factor 1,IGF-1 ELISA Kit 異丙凈(標準品) Dipropetryn 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)試劑盒 Bovine insulin-like growth
factor binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit 異菌脲標準溶液(100μg/ml,u=4%)
[3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide
standard solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4%
牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)試劑盒 Bovine Insulin-like growth
factor binding protein 2,IGFBP-2 ELISA kit 異氯磷(標準品) Dicapthon 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品
二乙基錫(標準品) Diethyltin-dichloride 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,10ng/μl溶于環(huán)己烷 牛亞硫酸鹽氧化酶(sulfite
oxidase,SO)試劑盒 Bovine Sulfite Oxidase(sulfite oxidase,SO)ELISA Kit
草萘胺(標準品) Napropamid 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛氧化酶(aldehyde oxidases,AO)試劑盒 Bovine aldehyde
oxidase I(aldehyde oxidases,AO)ELISA Kit
除蟲脲標準溶液(10μg/ml,u=3%)
Diflubenzuron solution 質(zhì)量規(guī)格:10μg/ml,u=3% 牛氧雜蒽氧化酶試劑盒 Bovine xahene
oxidase ELISA Kit
二噻農(nóng)(標準品) Dithianon 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛葉酸(FA)試劑盒 Bovine folic
acid,FA ELISA Kit
棉隆(標準品) Dazomet 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,97% 牛胰島素(Insulin)試劑盒 Bovine Insulin
ELISA kit
雙(標準品) Dichlorophene 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)ELISA檢測試劑盒BovineInsulin-likegrowthfactor1,IGF-1ELISAKit
96T/48T
異丙凈(標準品) Dipropetryn 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛胰島素樣生長因子1(IGF-1)試劑盒 Bovine
Insulin-like growth factor 1,IGF-1 ELISA Kit
異菌脲標準溶液(100μg/ml,u=4%)
[3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide
standard solution 質(zhì)量規(guī)格:100μg/ml,u=4% 牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)試劑盒 Bovine
insulin-like growth factor binding protein 1,IGFBP-1 ELISA Kit
異氯磷(標準品) Dicapthon 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白2(IGFBP-2)試劑盒 Bovine
Insulin-like growth factor binding protein 2,IGFBP-2 ELISA kit
4,4'-滴滴滴(標準品) p, p’-DDD 質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 牛胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)試劑盒 bovine
Insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3 ELISA kit
大鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)試劑盒 Rat angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit Boc-L-谷氨酰胺 Boc-Gln-OH 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR
英文名稱RatacetylcholinereceptoraibodyELISAKit大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)規(guī)格:96T/48T Boc-L-丙氨酸 N-丁二酯 Boc-Ala-OSu 質(zhì)量規(guī)格:BR
ELISAKitPL人胰脂肪酶規(guī)格:48T/96T 叔丁氧羰基-N-beta-三苯甲基-L-天門冬酰胺 Boc-N-beta-Trityl-L-asparagine 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
18674-16-3澤瀉醇A-24-醋酸酯品牌 Alisol A 24-acetate 英文名稱RatMaixmetalloproteinase-7—MMP-7ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)規(guī)格:96T/48T
18642-23-4補骨脂定說明書 psoralidin 英文名稱RatMaixmetalloproteinase-3—MMP-3ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶3(MMP-3)ELISAkit規(guī)格:96T/48T
18609-17-1白麻苷品牌 Quercetin-3-O-sophoroside 英文名稱RatMaixmetalloproteinase-2—MMP-2ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)規(guī)格:96T/48T
18607-90-4卡枯醇說明書 kakoul 英文名稱RatMaixmetalloproteinase-13—MMP-13ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)規(guī)格:96T/48T
18524-94-2馬錢苷廠家 Loganin 英文名稱RatMaixmetalloproteinase-10—MMP-10ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)規(guī)格:96T/48T
雞滑液囊支原體(MS)試劑盒熒光-PCR法實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM)
2μl
引物2(10PM)
2μl
Taq酶(2U/μl)
1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至
50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾高壓。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。