PCR實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  

產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷
靈敏度高：可檢測個位拷貝數(shù)的基因
特異性高：有效避免非特異性擴(kuò)增的出現(xiàn)
穩(wěn)定性高：復(fù)孔間差異小，實驗結(jié)果重復(fù)性強(qiáng)
擴(kuò)增性能優(yōu)：擴(kuò)增效率高，熒光信號強(qiáng)

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)**的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14μL N×14μL
酶混合物 1 μL N×1 μL
總量 15 μL N×15μL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

火炬松(loblollypine)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 第威德合金  Devarda's alloy  質(zhì)量規(guī)格：工業(yè)級

霍亂弧菌(Vibriocholerae)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20 二乙酰一肟(>98%，BR)  Diacetyl monoxime  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

肌動蛋白聚合作用(polymerization)檢測試劑盒20 馬來酸二乙酯(>98%，BR)  Diethyl maleate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA檢測試劑盒Chicken1,3-βDglucosidase 96T/48T 二氫細(xì)胞松弛素(>98%，BR)  Dihydrocytochalasin B  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

雞17-酮類(17-KS)ELISA檢測試劑盒Chicken17-ketosteroids,17-KS 96T/48T 二異辛胺(>98%，BR)  Diisooctylamine  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

雞5核苷酸酶(5-)ELISA檢測試劑盒Chicken5-Nucleotidase,5- 96T/48T 馬來酸二甲酯(>98%，BR)  Dimethyl maleate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR

雞B因子(BF)ELISA檢測試劑盒ChickenfactorB,BF 96T/48T 丁二酸二甲酯(>99%,BR)  Dimethyl succinate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

雞C反應(yīng)蛋白(CRP)ELISA檢測試劑盒ChickenC-ReactiveProtein,CRP 96T/48T 二甲基甲酮鈉鹽(>97%,BR)  Dimethylglyoxime  salt  質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

雞L苯氨酸解氨酶(PAL)ELISA檢測試劑盒ChickenL-Phenylalanineammonla-lyase,PAL 96T/48T 直接藍(lán)71(≥50%,BR)  Direct blue 71  質(zhì)量規(guī)格：≥50%,BR

雞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)ELISA檢測試劑盒ChickenN-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG 96T/48T 天狼猩紅  Direct red 80  質(zhì)量規(guī)格：BS
二乙酰一肟(>98%，BR)  Diacetyl monoxime  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 霍亂弧菌(Vibriocholerae)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20

馬來酸二乙酯(>98%，BR)  Diethyl maleate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 肌動蛋白聚合作用(polymerization)檢測試劑盒20

二氫細(xì)胞松弛素(>98%，BR)  Dihydrocytochalasin B  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 雞1,3-βD葡葡糖苷酶(1,3-βDglucosidase)ELISA檢測試劑盒Chicken1,3-βDglucosidaseELISAKit 96T/48T

二異辛胺(>98%，BR)  Diisooctylamine  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 雞17-酮類(17-KS)ELISA檢測試劑盒Chicken17-ketosteroids,17-KSELISAKit 96T/48T

馬來酸二甲酯(>98%，BR)  Dimethyl maleate  質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR 雞5核苷酸酶(5-)ELISA檢測試劑盒Humanα2macroglobulin,α2MGELISAKit人α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T BOC-L-脯氨酸  Boc-Pro-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

小鼠角蛋白9(K9)ELISA試劑盒 ，英文名： K9 ELISA Kit BOC-L-色氨酸  Boc-Trp-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

人β萘酚(β-naphthol)ELISA檢測試劑盒HumanBeta-naphtholELISAKit 96T/48T BOC-L-天冬氨酸  Boc-Asp-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

大鼠血管緊張素Ⅱ(ANG-Ⅱ)試劑盒 Rat angiotension Ⅱ,ANG-Ⅱ ELISA Kit BOC-L-谷氨酸  Boc-L-Glutamic acid  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

英文名稱RatacetylcholinereceptoraibodyELISAKit大鼠乙酰膽堿受體抗體(AChRab)規(guī)格：96T/48T BOC-L-亮氨酸  Boc-Leu-OH  質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR

谷氨酰胺脫羧酶 N-叔丁氧羰基-L-甲硫氨酸  BOC-L-Mine  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

ELISAKitACH人乙酰膽堿規(guī)格：48T/96T BOC-L-絲氨酸  N-(tert-Butoxycarbonyl)-L-serine  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

小鼠角蛋白18(K18)ELISA試劑盒 ，英文名： K18 ELISA Kit BOC-L-纈氨酸  Boc-Val-OH  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

人β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA檢測試劑盒Humanβ-glucosidaseELISAKit 96T/48T BOC-L-天冬酰胺  Boc-Asn-OH  質(zhì)量規(guī)格：≥98.5%,BR
HEC-1-B細(xì)胞，人內(nèi)膜腺癌細(xì)胞 大鼠腦膜細(xì)胞,RMC細(xì)胞 胰腺癌組織源性原代細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)/1mlZ-DEVD-pNAZ-DEVD-pNA 50MGDRY ICE-F

H22(小鼠肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2玫瑰紅6G Bcsic Rqd 1 989-38-8

HWP visceral Pellet 人類內(nèi)臟白前脂肪細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHDMEC NAMOLWTMARKER,DNALOWRANGEI-DRYICDNA Marker生物技術(shù)級100 gFrozen

T-109B彈性蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)10mL鹽酸-L-白酰-2-奈胺100克

F7 Others Mouse 小鼠 Coagulation Factor VII / FVII / F7 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對照) Percoll 100ml/1L 原裝 Pharmacia17089101
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
雞馬立克病毒(MDV)試劑盒熒光-PCR法二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
三、注意事項
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。zui好設(shè)立一個專用的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾高壓。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲存，從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。

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